以下是传染性支气管炎病毒PCR检测试剂盒的订购信息: 组成及试剂配制: 1、酶标板:一块(96孔) 2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。 3、 样品稀释液:1×20ml。 4、 检测稀释液A:1×10ml。 5、 检测稀释液B:1×10ml。 需要自备的器材: 1.仪器:分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。 2.耗材:荧光 PCR 反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯(DEPC)水 处理的灭菌离心管、吸头(10 µL、200 µL、1000 µL)、灭菌双蒸水。 3110 人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC) ( 5×105 ) 3120 人肺动脉成纤维细胞 (HPAF)( 5×105 ) 3200 人肺泡上皮细胞 (HPAEpiC)( 1×106 ) 3210 人支气管上皮细胞(HBEpiC)(5×105 ) 3220 人气管上皮细胞(HTEpiC)(5×105 ) 3230 人小气管上皮细胞(HSAEpiC)(5×105 ) 3300 人肺成纤维细胞 (HPF)( 5×105 ) 3400 人支气管平滑肌细胞 (HBSMC)( 5×105 ) 3410 人气管平滑肌细胞 (HTSMC)( 5×105 ) 8. 骨骼肌细胞系统 3500 人骨骼肌细胞 (HSkMC)( 5×105 ) 3510 人骨骼肌星形细胞(HSkMSC)(5×105) 3520 人骨骼肌成肌细胞(HSkMM)(5×105) 9. 肾脏细胞系统 4000 人肾小球内皮细胞 (HRGEC)( 5×105 ) 4100 人肾近端小管上皮细胞(HRPTEpiC) 4110 人肾皮质上皮细胞(HRCEpiC)( 5×105 ) 4120 人肾脏上皮细胞(HREpiC)( 5×105 ) 4200 人肾系膜细胞 (HRMC)(1×106 ) 10. 尿道细胞系统 4310 人膀胱平滑肌细胞(HBdSMC)( 5×105 ) 传染性支气管炎病毒PCR检测试剂盒 4320 人尿道上皮细胞(HUC)(5×105) 4330 人膀胱基质成纤维细胞(HBdSF)(5×105) 11. 前列腺细胞系统 4410 人前列腺上皮细胞(HPEpiC)(5×105) 4420 人前列腺成纤维细胞(HPrF)(5×105) 技术原理: DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。 在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性) 发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。 |