淋巴瘤 在细胞冻存时加入温保护剂,能大大提高冻存效果。常用的低温保护剂是DMSO,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤。 实验前准备: 1.将水浴锅预热至 37℃ 2.用 75%酒精擦拭紫外线照射 30min的超净工作台台面。 3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。 取出冻存管:根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。 迅速解冻:迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动,使管中的液体迅速融化。约 1-2min后冻存管内液体*溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。 平衡离心:用架盘天平平衡后,放入离心机中3000r/min 离心 3min 细胞的相关产品如下: EL4 淋巴瘤 AtT-20 小鼠垂体瘤 BC3H1, 鼠脑瘤 BV-2 小鼠小胶质瘤细胞 C6 大鼠脑胶质瘤 Cyc-tAg 小鼠T淋巴细胞瘤(SV40T抗原转染) EL-4 鼠T淋巴细胞瘤 FOX-NY 小鼠细胞 GH3 大鼠垂体瘤细胞 GT1.1 小鼠垂体瘤细胞(分泌促生长激素分泌激素) HEPA1-6 小鼠肝癌细胞 公司其他生物培养基产品有: 去氧胆酸钠 Desoxycholate Salt 用于抑制革兰氏阳性菌的生长 革兰氏染色液试剂盒 用于细菌革兰氏染色 Kovacs氏靛基质试剂盒 用于吲哚(靛基质)试验 甲基红指示剂盒 用于甲基红试验 V-P 试剂盒 用于V-P试验 硝酸盐还原试剂盒 用于硝酸盐还原试验 1%亚碲酸钾溶液 与亚碲酸钠培养基基础配套使用 萋 – 尼氏染色液(Ziehl – neelsen) 用于细菌抗酸染色 金胺O染色液 用于细菌抗酸染色 瑞氏染色液 用于细菌瑞氏染色 制备细胞悬液: 1.吸弃上清液。 2.向离心管内加入 10ml 培养液,吹打制成细胞悬液。 细胞计数:细胞浓度以 5×105/ml 为宜。 培养细胞 :将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内 ,将培养瓶放入37℃和5%CO2的培养箱内2-4小时(或者 24-48 小时)后换液继续培养培养,换液的时间由细胞情况而定。 初学者易犯错误: 1 水浴锅未预热或者未预热到 37℃。 2.水浴锅内冻存管太多,导致传热不佳,使融化时间延长。 3.离心前忘记平衡,导致离心机损坏和细胞丢失。 4.一次复苏细胞过多,忘记更换吸头和吸管,导致细胞交叉污染。 EL4 P815 小鼠肥大细胞 PA12 小鼠成纤维细胞 RTE 大鼠气管上皮细胞 SF9 昆虫卵巢细胞 SMC 兔主动脉平滑肌细胞 Vero 猴肾细胞 WEHI-3 小鼠血液细胞 Y2 小鼠成纤维细胞 L6 大鼠骨骼肌成肌细胞 NRK 小鼠结缔组织细胞 |