鼠肾细胞 在细胞冻存时加入温保护剂,能大大提高冻存效果。常用的低温保护剂是DMSO,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤。 称取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液浓度为 0.25%,用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水(若用双蒸水需要调 PH到 7.2左右)或 PBS(D-hanks)液中。搅拌混匀,置于 4℃内过夜。 用注射滤器抽滤消毒:配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器(0.22 微米微孔滤膜)抽滤除菌。然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。 细胞的相关产品如下: NRK 鼠肾细胞 G422 神经胶质瘤细胞 TC-1 HPV16,E6,E7和ras基因共转化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮细胞 SRA01/04 人晶体上皮细胞系 MCF-7 乳腺腺癌细胞 CNE-1 高分化鼻咽癌细胞 MEF-7/Adr 乳腺腺癌阿霉素耐药株 KB 口腔表皮样癌细胞 SK-BR-3 乳腺腺癌细胞 Hep-2 喉癌细胞 A2780 卵巢癌细胞 青、链霉素溶液的配制于消毒 1. 所用纯净水(双蒸水)需要 15 磅高压 20 分钟灭菌。 2.具体操作均在超净台内完成。青霉素是 80 万单位/瓶,用注射器加 4ml灭菌双蒸水。链霉素是100万单位/瓶,加5ml 灭菌双蒸水,即每毫升各为 20 万单位。 3.使用时溶入培养液中,使青链霉素的浓度zui终为 100 单位/ml。1单位=1 微克. 公司其他生物培养基产品有: TSN 琼脂 TSN Agar 用于产气荚膜梭菌的平板计数(Merck方法) 亚硫酸铁琼脂 Sulfite Iron Agar 用于肉和肉食产品中梭菌的计数(SN方法) TBB 培养基 Tyrobutyricum Broth Base 用于乳酪产品中梭菌的计数(Merck方法) CHO培养基基础 CHO Medium Base 用于厌氧菌的糖生化反应(Acumedia 方法) SCHAEDLER 琼脂 SCHAEDLER AGAR 用于厌氧菌的分离培养(Acumedia 方法) WILKINS-CHALGREN琼脂 WILKINS-CHALGREN AGAR 用于厌氧菌的分离培养(Acumedia 方法) MCP琼脂 MCP Agar 用于产气荚膜梭菌的计数和培养(Acumedia 方法) 厌氧菌琼脂 Anaerobic Agar 用于厌氧菌分离培养 CDC厌氧菌琼脂 CDC Anaerobic Agar 用于厌氧菌分离培养(Acumedia 方法) 溶血性链球菌 NRK B16 黑色素瘤细胞 MPC-83 胰腺腺泡癌细胞 C3 白血病细胞 RIN-m5F β胰岛素瘤 L1210 淋巴白血病细胞 MA891 乳腺癌细胞 TA2 自发高乳腺癌细胞 SP2/0 骨髓瘤细胞 U14 宫颈癌细胞 YAC-1 淋巴瘤细胞 RPMI1640 的制备与消毒: 1.溶解、调 PH 值、定容:先将培养基粉剂加入培养液体积 2/3 的双蒸水中,并用双蒸水冲洗包装袋 2-3 次(冲洗液一并加入培养基中),充分搅拌至粉剂全部溶解,并按照包装说明添加一定的药品.然后用注射器向培养基中加入配制好的青链霉素液各0.5ml, 使青链霉素的浓度zui终各为100单位/ml。然后用一个当量的盐酸和NaOH调 PH到 7.2 左右。zui后定容至1000ml,摇匀。 2.安装蔡式滤器:安装时先装好支架,按规定放好滤膜,用螺丝将不锈钢滤器和支架连接好。然后卸下支架腿分别用布包好待消毒。 3.抽滤:配制好的培养液通常用滤器过滤除菌。通常用蔡式滤器在超净工作台内过滤。 4.分装:将过滤好的培养液分装入小瓶内置于 4℃冰箱内待用。 5.使用前要向100ml培养液中加入1ml 谷氨酰胺溶液(4℃时两周有效)。 |