Mo-MuLV感染的3T3 在细胞冻存时加入温保护剂,能大大提高冻存效果。常用的低温保护剂是DMSO,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤。 细胞的相关产品如下: Mo-MuLV/3T3 Mo-MuLV感染的3T3 A-204 人横纹肌肉瘤 A375 人皮肤黑色素瘤细胞 A431 人皮肤基底细胞癌 A549 人肺癌细胞 A875 人黑色素瘤细胞 BeWo 人胎盘绒毛癌细胞 BGC-823 人胃腺癌细胞 BT474 人乳腺导管瘤 CACO-2 人结肠癌细胞 CaLu-3 人肺腺癌细胞 细胞计数实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 准备工作:取一瓶传代的细胞,按照《传代细胞培养(消化法)》中的传代方法繁殖细胞,待 长成单层后以被使用。 细胞悬液制备:细胞悬液的制备方法是用 0.25%的胰蛋白酶液消化、PBS液洗涤后,加入培养液(或 Hanks 液或 PBS等平衡盐溶液),吹打制成待测细胞悬液。 公司其他生物培养基产品有: 察氏琼脂 Czapek Dox Agar 用于青霉、曲霉鉴定及保存菌种用 产毒培养基 Toxin-Producing Medium 用于青霉、曲霉的产毒培养 马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA) Potato Dextrose Agar 用于霉菌、酵母菌计数(GB标准) 高盐察氏琼脂 Salt Czapek Dox Agar 用于霉菌和酵母菌的计数(GB标准) 沙氏琼脂培养基 Sabouraud’s Agar 用于真菌检测(GB标准) 玉米粉琼脂 Corn Meat Medium 用于真菌培养 孟加拉红培养基 Rose Bengal Medium 用于食品中霉菌及酵母菌总数测定 酵母粉葡萄糖氯霉素琼脂 Yeast Extract Dextrose Chloramphenicol Agar 用于食品中霉菌及酵母菌总数测定 Candida Elective 琼脂 Candida Elective Agar to Nickerson 用于食品中Candida及酵母菌总数测定(Merck方法) DTM培养基 DTM Medium 用于食品中真菌的培养(Merck方法) 细胞计数: 1.盖好盖玻片:取一套血球计数板,将特制的盖玻片盖在血球计数槽上。 2.制备计数用的细胞悬液:用吸管吸 5滴细胞悬液到一离心管中,加入 5滴台盼蓝染 液(0.4%)或苯胺黑,活细胞不会被染色,加入染液后就可以在显微镜下区别活细胞和死细胞。 3.将细胞悬液滴入计数板:将待测细胞悬液吹均匀,然后吸取少量悬液沿盖片边缘缓缓滴入,要保证盖片下充满悬液,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。 4.统计四个大格的细胞数:将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察,并移动计数板,当看到镜中出现计数方格后,数出四角的四个大铬(每个大格含有 16 个中铬)中没有被染液染上色的细胞数目。 5.计算原细胞悬液的细胞数:按照下面公式计算细胞密度:(细胞悬液的细胞数)/ml= ( 四个大格子细胞数/4) ×2×104 说明:公式中除以4 因为计数了4 个大格的细胞数。公式中乘以2因为细胞悬液于染液是 1:1 稀释。公式中乘以 104 因为计数板中每一个大格的体积为:1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm3 而 1ml=1000mm3 Mo-MuLV/3T3 CCC-HEK-1 人胚胎肾正常细 CCC-HB-2 人胚胎膀胱组织来源细胞 CCC-HIE-2 人胚胎肠粘膜细胞 CCC-HBE-2 人胚胎气管细胞 CCC-HEL-1 人胚肝二倍体细胞 CCC-HHM-2 人胚心肌组织来源细胞 CCC-HIE-2 人胚肠粘膜组织来源细胞 CCC-HPE-2 人胚胰腺组织来源细胞 CCC-SMC-1 兔主动脉平滑肌细胞 293sars181A Sars蛋白表达株 细胞计数要点: 1.进行细胞计数时,要求悬液中细胞数目不低于104个/ml,如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中; 2.要求细胞悬液中的细胞分散良好,否则影响计数准确性。 3.取样计数前,应充分混匀细胞悬液,尤其时多次取样计数时更要注意每次取样都 要混匀,以求计数准确; 4. 数细胞的原则是只数完整的细胞,若细胞聚集成团时,只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时,则只计上线,不计下线,只计右线,不计左线。 5. 操作时,注意盖片下不能有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中,否则要重新计数。 |