单核细胞型淋巴瘤细胞 分装稀释细胞: 1.分装:将细胞悬液吸出分装至 2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。 2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。zui后要做好标记。 继续培养: 用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2 培养箱中继续培养。传代细胞 2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积 25%时为一个+,占50%为++,占 75%时为+++。 传代细胞培养注意事项: 1.严格的无菌操作 2.适度消化:消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响,消化过程中应该注意培养细胞形态的变化,一旦胞质回缩,连接变松散,或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。 EDTA(0.02%乙二胺四乙酸二钠)消化液配方:EDTA 0.20g,NaCl 8.00g, KCl 0.20g, KH2PO4 0.02g, 葡萄糖 2.00g,0.5%酚红 4ml, 加入蒸馏水定容至 1000ml。10磅 20min 高压灭菌,使用时调节 PH 值到 7.4。注意 EDTA不能被血清中和,使用后培养瓶要*清洗,否则再培养时细胞容易脱壁。 细胞的复苏 : 细胞复苏的原则-快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 在细胞冻存时加入温保护剂,能大大提高冻存效果。常用的低温保护剂是DMSO,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤。 细胞的相关产品如下: THP 1 单核细胞型淋巴瘤细胞 5000 人肝窦内皮细胞 5100 人肝内胆管上皮细胞 5200 人肝细胞 5300 人肝星形细胞 4000 人肾小球内皮细胞 4100 人肾小管上皮细胞 4110 人肾皮质上皮细胞 4120 人肾脏上皮细胞 4200 人肾系膜细胞 2700 人食管上皮细胞 实验前准备: 1.将水浴锅预热至 37℃ 2.用 75%酒精擦拭紫外线照射 30min的超净工作台台面。 3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。 取出冻存管:根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。 迅速解冻:迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动,使管中的液体迅速融化。约 1-2min后冻存管内液体*溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。 平衡离心:用架盘天平平衡后,放入离心机中3000r/min 离心 3min 公司其他生物培养基产品有: 哥伦比亚CNA琼脂基础 Columbia CAN Agar Base 用于分离革兰氏阳性球菌(Acumedia方法) m-FC 琼脂 m-FC Agar 用于大肠菌群的滤膜法检测(MERCK方法) m-FC肉汤 m-FC Broth 用于大肠菌群的滤膜法检测(MERCK方法) 滤膜肠球菌琼脂 m- Enterococcus Selective Agar 用于肠球菌的滤膜法检测(MERCK方法) 酵母粉琼脂 Yeast Extract Agar 用于水中细菌总数的检测(ISO标准) 去氧胆酸盐枸椽酸盐乳糖蔗糖琼脂 DCLS Agar 用于致病性肠杆菌的分离培养 去氧胆酸盐枸椽酸盐琼脂 Desoxycholate Citrate Agar 用于细菌总数的测定和分离培养 胰胨大豆胨固绿琼脂 Tryptic Soy Fast Green Agar 用于滤膜细菌总数的测定和分离培养(NEOGEN方法) LES Endo 琼脂 m-Endo Agar,LES 用于滤膜细菌计数(Merck方法) m-TGE 肉汤 m-TGE Broth 用于奶制品中滤膜细菌计数(Acumedia方法) THP 1 3100 人肺动脉内皮细胞 3110 人肺动脉平滑肌细胞 3120 人肺动脉成纤维细胞 3200 人肺泡上皮细胞 3210 人支气管上皮细胞 3220 人气管上皮细胞 3230 人小气道上皮细胞 3300 人肺成纤维细胞 3400 人支气管平滑肌细胞 3410 人气管平滑肌细胞 |