纤维肉瘤细胞 在细胞冻存时加入温保护剂,能大大提高冻存效果。常用的低温保护剂是DMSO,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤。 传代细胞培养注意事项: 1.严格的无菌操作 2.适度消化:消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响,消化过程中应该注意培养细胞形态的变化,一旦胞质回缩,连接变松散,或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。 EDTA(0.02%乙二胺四乙酸二钠)消化液配方:EDTA 0.20g,NaCl 8.00g, KCl 0.20g, KH2PO4 0.02g, 葡萄糖 2.00g,0.5%酚红 4ml, 加入蒸馏水定容至 1000ml。10磅 20min 高压灭菌,使用时调节 PH 值到 7.4。注意 EDTA不能被血清中和,使用后培养瓶要*清洗,否则再培养时细胞容易脱壁。 细胞的复苏 : 细胞复苏的原则-快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 细胞的相关产品如下: HT1080 纤维肉瘤细胞 MA891 乳腺癌细胞 TA2 自发高乳腺癌细胞 SP2/0 骨髓瘤细胞 U14 宫颈癌细胞 YAC-1 淋巴瘤细胞 G422 神经胶质瘤细胞 TC-1 HPV16,E6,E7和ras基因共转化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮细胞 SRA01/04 人晶体上皮细胞系 MCF-7 乳腺腺癌细胞 CNE-1 高分化鼻咽癌细胞 实验前准备: 1.将水浴锅预热至 37℃ 2.用 75%酒精擦拭紫外线照射 30min的超净工作台台面。 3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。 取出冻存管:根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。 迅速解冻:迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动,使管中的液体迅速融化。约 1-2min后冻存管内液体*溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。 平衡离心:用架盘天平平衡后,放入离心机中3000r/min 离心 3min 公司其他生物培养基产品有: m-FC肉汤 m-FC Broth 用于大肠菌群的滤膜法检测(MERCK方法) 滤膜肠球菌琼脂 m- Enterococcus Selective Agar 用于肠球菌的滤膜法检测(MERCK方法) 酵母粉琼脂 Yeast Extract Agar 用于水中细菌总数的检测(ISO标准) 去氧胆酸盐枸椽酸盐乳糖蔗糖琼脂 DCLS Agar 用于致病性肠杆菌的分离培养 去氧胆酸盐枸椽酸盐琼脂 Desoxycholate Citrate Agar 用于细菌总数的测定和分离培养 胰胨大豆胨固绿琼脂 Tryptic Soy Fast Green Agar 用于滤膜细菌总数的测定和分离培养(NEOGEN方法) LES Endo 琼脂 m-Endo Agar,LES 用于滤膜细菌计数(Merck方法) m-TGE 肉汤 m-TGE Broth 用于奶制品中滤膜细菌计数(Acumedia方法) m-TEC琼脂 m-TEC Agar 用于水中耐热细菌滤膜计数(Acumedia方法) 现隐肉汤 Presence Absence Broth 用于水中大肠菌群计数(US-EPA方法) 制备细胞悬液: 1.吸弃上清液。 2.向离心管内加入 10ml 培养液,吹打制成细胞悬液。 细胞计数:细胞浓度以 5×105/ml 为宜。 培养细胞 :将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内 ,将培养瓶放入37℃和5%CO2的培养箱内2-4小时(或者 24-48 小时)后换液继续培养培养,换液的时间由细胞情况而定。 HT1080 Lewis 肺癌细胞 EAC 艾氏腹水瘤细胞 LA795 肺腺癌细胞 S180 腹水瘤细胞 H22 肝癌细胞 B16 黑色素瘤细胞 MPC-83 胰腺腺泡癌细胞 C3 白血病细胞 RIN-m5F β胰岛素瘤 L1210 淋巴白血病细胞 |