人肾癌Wilms
在细胞冻存时加入温保护剂，能大大提高冻存效果。常用的低温保护剂是DMSO，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。 称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为 0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调 PH到 7.2左右）或 PBS（D-hanks）液中。搅拌混匀，置于 4℃内过夜。
用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22 微米微孔滤膜）抽滤除菌。然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
青、链霉素溶液的配制于消毒
1. 所用纯净水（双蒸水）需要 15 磅高压 20 分钟灭菌。
2.具体操作均在超净台内完成。青霉素是 80 万单位/瓶，用注射器加 4ml灭菌双蒸水。链霉素是100万单位/瓶，加5ml 灭菌双蒸水，即每毫升各为 20 万单位。
3.使用时溶入培养液中，使青链霉素的浓度zui终为 100 单位/ml。1单位＝1 微克.
RPMI1640 的制备与消毒：
1.溶解、调 PH 值、定容：先将培养基粉剂加入培养液体积 2/3 的双蒸水中,并用双蒸水冲洗包装袋 2-3 次（冲洗液一并加入培养基中）,充分搅拌至粉剂全部溶解,并按照包装说明添加一定的药品.然后用注射器向培养基中加入配制好的青链霉素液各0.5ml, 使青链霉素的浓度zui终各为100单位/ml。然后用一个当量的盐酸和NaOH调 PH到 7.2 左右。zui后定容至1000ml，摇匀。
2.安装蔡式滤器：安装时先装好支架，按规定放好滤膜，用螺丝将不锈钢滤器和支架连接好。然后卸下支架腿分别用布包好待消毒。
3.抽滤：配制好的培养液通常用滤器过滤除菌。通常用蔡式滤器在超净工作台内过滤。
4.分装：将过滤好的培养液分装入小瓶内置于 4℃冰箱内待用。 5.使用前要向100ml培养液中加入1ml 谷氨酰胺溶液（4℃时两周有效）。
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血清的灭火： 细胞培养常用的是小牛血清，新买来的血清要在56℃水浴中灭火 30 分钟后，再经过抽滤方可加入培养基中使用。 |
