人真皮成纤维母细胞-新生 制备细胞悬液: 1.吸弃上清液。 2.向离心管内加入 10ml 培养液,吹打制成细胞悬液。 细胞计数:细胞浓度以 5×105/ml 为宜。 培养细胞 :将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内 ,将培养瓶放入37℃和5%CO2的培养箱内2-4小时(或者 24-48 小时)后换液继续培养培养,换液的时间由细胞情况而定。 初学者易犯错误: 1 水浴锅未预热或者未预热到 37℃。 2.水浴锅内冻存管太多,导致传热不佳,使融化时间延长。 3.离心前忘记平衡,导致离心机损坏和细胞丢失。 4.一次复苏细胞过多,忘记更换吸头和吸管,导致细胞交叉污染。 细胞计数实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 细胞的相关产品如下: 2310 人真皮成纤维母细胞-新生 SRSV/3T3 SRSV转化的3T3 CTLL-2 小鼠T细胞 CHL 中国仓鼠肺细胞 BRL 肝细胞 NRK 鼠肾细胞 L-6TG 肌母细胞 V79 中国仓鼠肺细胞 BHK 幼仓鼠肾细胞 CHO 中国仓鼠卵巢细胞 R1610 中国仓鼠体细胞 细胞计数: 1.盖好盖玻片:取一套血球计数板,将特制的盖玻片盖在血球计数槽上。 2.制备计数用的细胞悬液:用吸管吸 5滴细胞悬液到一离心管中,加入 5滴台盼蓝染 液(0.4%)或苯胺黑,活细胞不会被染色,加入染液后就可以在显微镜下区别活细胞和死细胞。 3.将细胞悬液滴入计数板:将待测细胞悬液吹均匀,然后吸取少量悬液沿盖片边缘缓缓滴入,要保证盖片下充满悬液,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。 4.统计四个大格的细胞数:将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察,并移动计数板,当看到镜中出现计数方格后,数出四角的四个大铬(每个大格含有 16 个中铬)中没有被染液染上色的细胞数目。 5.计算原细胞悬液的细胞数:按照下面公式计算细胞密度:(细胞悬液的细胞数)/ml= ( 四个大格子细胞数/4) ×2×104 说明:公式中除以4 因为计数了4 个大格的细胞数。公式中乘以2因为细胞悬液于染液是 1:1 稀释。公式中乘以 104 因为计数板中每一个大格的体积为:1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm3 而 1ml=1000mm3 公司其他生物培养基产品有: PYG 液体培养基基础 PYG Broth Base 用于双歧杆菌增菌培养,使用时需加入氯化血红素和维生素K1(GB标准) 胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤(TSB-YE) Trypticase Soy-Yeast Extract Broth 用于单增李氏菌增菌培养(SN、GB标准) 萘啶酮酸 每支添加于225ml HB4150、HB4192中(SN、GB标准) 吖啶黄素 每支添加于225ml HB4150、HB4192中(SN、GB标准) 放线菌酮 每支添加于225ml HB4150中(GB标准) 胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-YE) Trypticase Soy-Yeast Extract Agar 用于单增李氏菌的分纯,培养,可用于做7%羊血琼脂(SN标准) 李氏菌选择性培养基基础(MMA) Modified Mcbride Agar Base 用于单增李氏菌选择性分离 复达欣 每支添加于 100ml HB4155 糖发酵基础肉汤 Bromcresol Purple Broth Base 适用于微生物检验中各种糖发酵实验,无菌加入各种糖醇类物质(SN标准) 李氏菌增菌肉汤(LB1,LB2)基础 Listeria Enrichment Broth Base 添加奈啶酮酸,吖啶黄素,即为LB1,LB2,用于李氏菌二步增菌(GB标准) 2310 ZR-75-1 乳腺导管癌细胞 SF767 脑瘤细胞 3T3 小鼠胚胎成纤维细胞 L929 小鼠成纤维细胞 3T3/e 小鼠成纤维细胞 Mo-MuLV/3T3 Mo-MuLV感染的3T3 3T3TK 小鼠成纤维细胞 NIH3T3 NIH SWISS 小鼠胚细胞 PA317 小鼠胚胎成纤维细胞 Ana-1 小鼠巨噬细胞 准备工作:取一瓶传代的细胞,按照《传代细胞培养(消化法)》中的传代方法繁殖细胞,待 长成单层后以被使用。 细胞悬液制备:细胞悬液的制备方法是用 0.25%的胰蛋白酶液消化、PBS液洗涤后,加入培养液(或 Hanks 液或 PBS等平衡盐溶液),吹打制成待测细胞悬液。 |