细胞名称 人胚肺二倍体细胞；KMB-17 形态特性 成纤维细胞样 生长特性 贴壁生长 特征特性 来自于4周龄女孩胚胎，1975年中国医学科学院昆明医学生物学研究所建立；可作为转染宿主，用于肺损伤或分化的研究。 培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 新生牛血清，10%；水解乳蛋白，10% 传代方法 1：2-1：4 传代情况 P10 冻存条件 基础培养液+20%牛血清+10%DMSO 支原体检测 培养法（-） STR Amelogenin:X； D7S820:9,11；CSF1PO:12；D13S317:9,12；D16S539:11,13；D18S51:14,17；D21S11:29,30；D3S1358:16；D5S818:13；D8S1179:11,13；FGA:20,27；PentaD:9,13；PentaE:12,15；TH01:7；TPOX:10,11；vWA:14,18 同工酶 人B,NP,G8PG,MD,AST 染色体 产品图片：
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用： 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名称： CD36
肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养（GB标准） 英文名称： KLK11
葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名称： CD97
哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用： 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验，还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称： NTRK3
血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用： 加入脱纤维羊血或兔血，制成血琼脂培养基，用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10－... 英文名称： HA
胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用： 可广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称： HA
Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用： 试剂A和试剂B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名称： SPARCL1
PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM琼脂。 英文名称： IL1RL1
李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名称： IL13RA1
李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名称： PECAM1
EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名称： TNF 抗原 IFN- Beta (Interferon Beta)Anti-mouse,rat 干扰素-β抗原 IFN- Beta (Interferon Beta 0.5mg human 干扰素-β抗原 IFN- Beta (Interferon Beta) human 干扰素-β抗原 IFITM1 (interferon induced transmembrane protein 1 0.5mg 干扰素诱导跨膜蛋白1抗原 IFITM1 (interferon induced transmembrane protein 1) 干扰素诱导跨膜蛋白1抗原 IFABP(Intestinal Fatty acid binding protein 0.5mg 小肠型脂肪酸结合蛋白抗原 IFABP(Intestinal Fatty acid binding protein) 小肠型脂肪酸结合蛋白抗原 IDE 胰岛素降解酶（抗原 0.5mg IDE 胰岛素降解酶（抗原） ICAM-2/CD102(intercellular adhesion molecules-2 0.5mg 细胞间粘附分子-2抗原 ICAM-2/CD102(intercellular adhesion molecules-2) 细胞间粘附分子-2抗原 ICAD(Inhibitor of Caspase-Activated DNase 0.5mg ICAD(Inhibitor of Caspase-Activated DNase ) Caspase 激活的脱氧核糖核酸酶抑制剂（抗原） Iba-1(Ionized calcium bindingadaptor molecule-1 0.5mg 离子钙接头蛋白抗原 Iba-1(Ionized calcium bindingadaptor molecule-1) 离子钙接头蛋白抗原 IASPP(inhibitory member of the ASPP family 0.5mg IAS ANti-V5 tag/FITC 荧光素标记V5 tag标签抗体IgG 人胚肺二倍体细胞；KMB-17Anti-V5 tag/HRP 辣根过氧化物酶标记V5 tag标签抗体IgG Anti-V.cholera Ogawa/FITC 荧光素标记01群小川型霍乱弧菌抗体IgG Anti-VCP/p97 /FITC 荧光素标记抗含缬酪肽蛋白抗体IgG (Influenza A virus)C 操作方法:
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。
4. 37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。
(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟）
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |
