细胞名称 人肾癌Wilms细胞；G401 形态特性 上皮样 生长特性 贴壁生长 特征特性 该细胞来源于一名3个月大的婴儿的肾Wilms瘤，由于该类肿瘤分类的改变，经Garvin等鉴定后发现该细胞来源于肾横纹肌样瘤。该细胞分泌肾母细胞生长因子（nephroblast growth factor，NB-GF)。 培养条件 McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 10%FBS 传代方法 1:3传代；3~4天1次。 传代情况 C5 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 培养法（-） STR Amelogenin：X，Y；CSF1PO：11，13；D13S317：9，14；D16S539：12；D18S51：14；D19S433：13，14；D21S11：31，32.2；D2S1338：18，24；D3S1358：16，18；D5S818：13；D7S820：11，14；D8S1179：13，14；FGA：24，27；TH01：8，9.3；TPOX：8，11；vWA：16； 同工酶 染色体 亚二倍体，XY 产品图片：
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用： 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名称： CD36
肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养（GB标准） 英文名称： KLK11
葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名称： CD97
哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用： 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验，还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称： NTRK3
血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用： 加入脱纤维羊血或兔血，制成血琼脂培养基，用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10－... 英文名称： HA
胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用： 可广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称： HA
Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用： 试剂A和试剂B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名称： SPARCL1
PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM琼脂。 英文名称： IL1RL1
李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名称： IL13RA1
李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名称： PECAM1
EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名称： TNF 三乙醇胺盐酸盐 TRIETHANOLAMINE HYDROCHLORIDE 637-39-8 100G 试剂级 三乙醇胺盐酸盐 TRIETHANOLAMINE HYDROCHLORIDE 637-39-8 500G 试剂级 RiboZol RNA 抽提试剂 RIBOZOL, RNA EXTRACTION REAGENT 100 ml RiboZol RNA 抽提试剂 RIBOZOL, RNA EXTRACTION REAGENT 200 ml RiboZol RNA 抽提试剂 RIBOZOL, RNA EXTRACTION REAGENT 30 ml 优势型剥离试剂 VANTAGE REVIEW STRIPPING BUFFER 500 ml 快速荧光染料 QUICK-VIEW FL. VIABILITY STAIN 5 ml RNA ladder RIBOREADY 100B RNA LADDER KIT RNA ladder RIBOREADY 1KB RNA LADDER KIT 常规分析用琼脂糖 AGAROSE RA 100G 生物技术级 常规分析用琼脂糖 AGAROSE RA 1 Kg 生物技术级 常规分析用琼脂糖 AGAROSE RA 250G 生物技术级 常规分析用琼脂糖 AGAROSE RA 25G 生物技术级 常规分析用琼脂糖 AGAROSE RA 500G 生物技术级 IPTG (NAO) 367-93-2 10 g 高纯级 IPTG, 非动物源 IPTG (NAO) 367-93-1 1 g 高纯级 十八水硫酸铝 ALUMINUM SULFATE OCTADECAHYDRATE 100G ng试剂盒-兔(湿转) RAPID WES Anti-p-PKC beta 1/2/FITC 荧光素标记磷酸化蛋白激酶C β1/β2抗体IgG Anti-PKC delta/FITC 荧光素标记蛋白激酶C亚性D型抗体IgG Anti-PKC gamma/SCA14/FITC 荧光素标记蛋白激酶C亚型G抗体IgG Anti-PKN2 /FITC 荧光素标记蛋白激酶N2抗体IgG Anti-HSP-70/HRP 辣根过氧化物酶标记热休克蛋白70抗体IgG Anti-PKR/FITC 荧光素标记蛋白激酶R/双链RNA依赖蛋白激酶抗体IgG Anti-Phospho-PKR (Thr446) /FITC 荧光素标记磷酸化蛋白激酶R抗体IgG Anti-Phospho-PKR (Thr451) /FITC 荧光素标记磷酸化蛋白激酶R抗体IgG Anti-Phospho-PKR (Thr446/451) /FITC 荧光素标记磷酸化蛋白激酶R抗体IgG Anti-Phospho-PRK1 (Thr774)/PRK2 (Thr816) /FITC 荧光素标记磷酸化内分泌腺衍生血管内皮生长因子抗体IgG Anti-HSP-90 Alpha/HRP 辣根过氧化物酶标记热休克蛋白90α抗体IgG Anti-HSP-90 Beta /HRP 辣根过氧化物酶标记热休克蛋白90β抗体IgG Anti-CD4/HRP 辣根过氧化物酶标记CD4抗体IgG 人肾癌Wilms细胞；G401Anti-Insulin/HRP 辣根过氧化物酶标记胰岛素抗体IgG Anti-PLAU/uPA/FITC 荧光素标记尿激酶型纤溶酶原激活因子抗体IgG Anti-Plectin/FITC 荧光素标记网蛋白抗体IgG Anti-PLAUR/uPAR/FITC 操作方法:
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。
4. 37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。
(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟）
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |
