细胞名称 人子宫内膜低分化腺癌细胞；EAG3 形态特性 上皮样；多角形 生长特性 贴壁生长 特征特性 培养条件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS 传代方法 1:2传代，3天传代一次 传代情况 P21 冻存条件 基础培养基+8%DMSO+36%FBS 支原体检测 培养法（-） STR 同工酶 染色体 产品图片：
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用： 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名称： CD36
肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养（GB标准） 英文名称： KLK11
葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名称： CD97
哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用： 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验，还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称： NTRK3
血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用： 加入脱纤维羊血或兔血，制成血琼脂培养基，用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10－... 英文名称： HA
胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用： 可广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称： HA
Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用： 试剂A和试剂B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名称： SPARCL1
PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM琼脂。 英文名称： IL1RL1
李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名称： IL13RA1
李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名称： PECAM1
EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名称： TNF Anti-Phospho-CDK2 (Thr160) 磷酸化周期素依赖性激酶2抗体 250克 Lysine Iron Agar LIA琼脂 食品中沙门氏菌生化试验 Anti-CDK3 周期素依赖性激酶3抗体 250克 MIO Medium 动力吲哚鸟氨酸培养基 动力、吲哚和鸟氨酸试验 Anti-CDK4 周期素依赖性激酶4抗体 250克 E Neutralizing Broth D-E中和肉汤 经防腐剂或消毒剂处理的样品增菌培养 Anti-CDK5 周期素依赖性激酶5抗体 250克 E Neutralizing Agar D-E中性琼脂 卫生环境中微生物的分离培养, 消毒效果测定 Anti-CDK6 周期素依赖性激酶6抗体 250克 M-Broth M肉汤 牛奶和乳制品中乳酸菌检测和增菌培养 Anti-CDK7 周期素依赖性激酶7抗体 250克 BGS Agar BGS琼脂 沙门氏菌分离培养 Anti-CDK8 周期素依赖性激酶8抗体 100克 Xylose Lysine Desoxycholate Medium XLD琼脂培养基 分离志贺氏菌属和沙门氏菌 Anti-CDK9 周期素依赖性激酶9抗体 250克 Desoxycholate Citrate Agar 脱氧胆酸钠枸橼酸盐琼脂 细菌总数的测定和分离培养,沙门氏菌分离培养 Anti-Phospho-CDK9 (Thr186) 磷酸化周期素依赖性激酶9抗体 250克 DCLS Agar DCLS琼脂 致病性肠杆菌的分离 Anti-CDKN1C/p57 Kip2 周 染料级 3.3'-二氨基联苯胺 试剂盒 DAB SUBSTRATE SYSTEM 200ML 生物技术级 TMB膜底物溶液 TMB MEMBRANE SUBSTRATE 100ML 生物技术级 去除核酸酶试剂 NUCLEASELIMINATOR 100ML 生物技术级 去除核酸酶喷剂 NUCLEASELIMINATOR PUMP 1 Pump 生物技术级 去除核酸酶纸巾 NUCLEASELIMINATOR WIPES 25 Pack 生物技术级 去除核酸酶试剂 NUCLEASELIMINATOR 500ML 生物技术级 去除核酸酶喷剂 NUCLEASELIMINATOR PUMP 1 Pump 生物技术级 中性红 NEUTRAL RED CERTIFIED 553-24-2 100G 生物染料级 中性红 NEUTRAL RED, CERTIFIED 553-24-2 25G 生物染料级 中性红 NEUTRAL RED, CERTIFIED 生物染料级 杆菌肽 BACITRACIN ZINC 1405-89-6 500kU 美国药典级 硫酸亚铁,无水 FERROUS SULFATE, ANHYDROUS 7720-78-7 1KG 美国药典级 人子宫内膜低分化腺癌细胞；EAG3硫酸亚铁,无水 FERROUS SULFATE, ANHYDROUS 7720-78-7 2.5KG 美国药典级 硫酸亚铁,无水 FERROUS SULFATE, ANHYDROUS 7720-78-7 500G 美国药典级 HCTF 20X, 2-COMPONENT 100ML HISTOCHOICE 清洗剂 HISTOCHOICE CLEARING AGENT 1L 操作方法:
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。
4. 37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。
(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟）
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |
