细胞名称 人肝癌细胞；Hep3b 形态特性 上皮细胞样 生长特性 贴壁生长 特征特性 Hep-3b细胞建系于1979年，源自一位患有肝癌的7岁黑人男童。该细胞产生甲胎蛋白（alpha-fetoprotein)、乙肝表面抗原（BHsAg) 、白蛋白、巨球蛋白、α- 抗胰蛋白酶（alphal-antitrypsin)、转铁蛋白、补体（C3)、C3活性载体，纤维原等，具有广泛的研究价值。 培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS 传代方法 1:4～1:6传代，每周换液2次 传代情况 C2 冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS 支原体检测 培养法（-） STR Amelogenin：X；CSF1PO：8；D13S317：12，14；D16S539：10；D18S51：20；D19S433：12.2，14；D21S11：30，31；D2S1338：21，25；D3S1358：15，OL；D5S818：13；D7S820：8，10；D8S1179：12；FGA：18；TH01：6，7；TPOX：9；vWA：17； 同工酶 染色体 60～82 产品图片：
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用： 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名称： CD36
肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养（GB标准） 英文名称： KLK11
葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名称： CD97
哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用： 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验，还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称： NTRK3
血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用： 加入脱纤维羊血或兔血，制成血琼脂培养基，用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10－... 英文名称： HA
胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用： 可广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称： HA
Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用： 试剂A和试剂B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名称： SPARCL1
PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM琼脂。 英文名称： IL1RL1
李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名称： IL13RA1
李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名称： PECAM1
EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名称： TNF Anti-C-Met/Met/HGFR 肝细胞生长因子受体抗体 250克 VRBG Agar 结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂 奶粉中坂崎杆菌的分离培养 Anti-Phospho-Met (Tyr1003) 磷酸化肝细胞生长因子受体(原癌基因)抗体 250克 Columbia CAN Agar Base 哥伦比亚CAN琼脂基础 分离革兰氏阳性球菌 Anti-Phospho-Met (Tyr1234/1235) 磷酸化肝细胞生长因子受体(原癌基因)抗体 250克 M-FC Agar 滤膜粪大肠菌琼脂 大肠杆菌群的滤膜法检测 Anti-Phospho-Met (Tyr1349) 磷酸化肝细胞生长因子受体(原癌基因)抗体 250克 M-FC Broth 滤膜粪大肠菌肉汤 大肠杆菌群的滤膜法检测 Anti-CMKLR1/CHEMR23 趋化样因子受体1抗体 250克 Meat Infusion Agar 肉浸液琼脂 一般细菌培养 Anti-MTLC/C-myc 致癌基因抗体 250克 Simmons Citrate Agar 西蒙氏枸橼酸盐琼脂 用于肠道菌的柠檬盐利用试验 Anti-phospho C-Myc(Thr58/pSer62) 磷酸化致癌基因C-Myc抗体 250克 Christensen Citrate Medium 克氏柠檬酸盐培养基 肠杆菌鉴别 Anti-phospho C-Met/HGFR(Tyr1365) 磷酸化原癌基因c-Met抗体 250克 Lactose Ferment Broth 乳糖胆盐发酵管培养基 用于大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的测定 Anti-c-Myc tag c-Myc tag标签抗体 250克 Selenite Cystine Broth SC增菌液 沙门氏菌选择性增菌培养 Anti-AU5 tag AU5 tag标签抗体 250克 Selenite Enrichment Medium SE增菌液 增殖标本中的沙门氏菌 Anti-AU1 tag AU1 tag标签抗体 250克 Brilltant Green Agar 亮绿琼脂 沙门氏菌分离培养 Anti- Glu-Glu tag抗体 250克 Bri AEBSF AEBSF 30827-99-7 250MG 超纯级 AEBSF AEBSF 30827-99-7 500MG 超纯级 AEBSF AEBSF 30827-99-7 50MG 超纯级 胃蛋白酶抑制剂 PEPSTATIN 26305-03-3 25MG 超纯级 胃蛋白酶抑制剂 PEPSTATIN 26305-03-3 5MG 超纯级 胃蛋白酶抑制剂 PEPSTATIN A 超纯级 胰凝乳蛋白酶抑制剂 CHYMOSTATIN 9076-44-2 5MG 超纯级 磷酰二肽 PHOSPHORAMIDON 119942-99-3 5MG 超纯级 E-64 E-64 66701-25-5 5MG 超纯级 HEPPSO, FREE ACID HEPPSO FREE ACID 68399-78-0 100G 超纯级 HEPPSO, FREE ACID HEPPSO FREE ACID 68399-78-0 25G 超纯级 HEPPS (EPPS) HEPPS (EPPS) 16052-06-5 100G 超纯级 HEPPS (EPPS) HEPPS (EPPS) 16052-06-5 25G 超纯级 MOPSO MOPSO FREE ACID 68399-77-9 100G 超纯级 人肝癌细胞；Hep3bMOPSO MOPSO FREE ACID 68399-77-9 25G 超纯级 MOPSO MOPSO, FREE ACID 5kg 超纯级 POPSO, Na2 POPSO DISODIUM SALT 108321-07-9 100G 超纯级 POPSO, Na2 POPSO DISODIUM SALT 108321-07-9 25G 超纯级 操作方法:
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。
4. 37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。
(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟）
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |
