细胞名称 人胫骨肉瘤细胞；U-2 OS 形态特性 上皮细胞样 生长特性 贴壁生长 特征特性 该细胞是1964年从一位15岁女性肉瘤患者的胫骨中分离出来的，适合做转染宿主 培养条件 McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 10%FBS 传代方法 1:3传代,2-3天传一代 传代情况 PN5 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 阴性 STR AMEL:X,X；CSF1PO:13,13；D12S391:19,20；D13S317:13,13；D16S539:11,12；D18S51:14,14；D19S433:15,15；D21S11:31,31；D2S1338:20,24；D2S441:10,14；D3S1358:16,16；D5S818:11,11；D6S1043:11,11；D7S820:11,12；D8S1179:12,14；FGA:20,20；Penta D:9,9；Penta E:10,13；TH01:6,9.3；TPOX:11,1 同工酶 染色体 产品图片：
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用： 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名称： CD36
肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养（GB标准） 英文名称： KLK11
葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名称： CD97
哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用： 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验，还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称： NTRK3
血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用： 加入脱纤维羊血或兔血，制成血琼脂培养基，用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10－... 英文名称： HA
胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用： 可广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称： HA
Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用： 试剂A和试剂B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名称： SPARCL1
PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM琼脂。 英文名称： IL1RL1
李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名称： IL13RA1
李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名称： PECAM1
EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名称： TNF 兔抗人、大、小鼠细胞分裂周期蛋白25抗体IgG Anti-Phospho-cdc25A (Thr506) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化细胞分裂周期蛋白25抗体IgG Anti-Phospho-cdc25A (Ser76) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化细胞分裂周期蛋白25抗体IgG Anti-Phospho-cdc25A ( Ser178) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化细胞分裂周期蛋白25抗体IgG Anti-Cdc34/FITC 荧光素标记细胞周期调控因子34IgG Anti-CDC42/FITC 荧光素标记细胞分化周期CDC42蛋白抗体IgG Anti-Phospho-CDC42 (Ser71) /FITC 荧光素标记磷酸化细胞分化周期CDC42蛋白抗体IgG Anti-Jagged1/CD339 /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠Jagged1/CD339抗体IgG Anti-CDK1/FITC 荧光素标记周期素依赖性激酶1抗体IgG Anti-CDK2/FITC 荧光素标记周期素依赖性激酶2抗体IgG Anti-CDK3 /FITC 荧光素标记周期素依赖性激酶3抗体IgG Anti-CDK4/FITC 荧光素标记周期素依赖性激酶4抗体IgG Anti-CDK5/FITC 荧光素标记周期素依赖性激酶5抗体IgG Anti-CDK6/FITC 荧光素标记周期素依赖性激酶6抗体IgG Anti-CDK7/Cyclin H/MAT1 /FITC 荧光素标记周期素依赖性激酶7抗体IgG Anti-CDK8/FITC 荧光素标记周期素依赖性激酶8抗体IgG Anti-CDK9/FITC 荧光素标记周期素依赖性激酶9抗体IgG Anti-Phospho-CDK9 (Thr186) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化周期素依赖性激酶9抗体IgG Anti-CD133/RBITC 红色荧光素罗丹明 (RBITC)标记兔抗人、大、小鼠和果蝇CD133抗体IgG Anti-CD46/RBITC 红色荧光素罗丹明(RBITC)标记CD46膜辅蛋白抗体IgG Anti-Cdkn1c/p57/Kip2 /FITC 荧光素标记周期 D 81422-93-7 20mg/支 连翘酯苷A Forsythoside A 连翘酯素 79916-77-1 20mg/支 千金子二萜醇二乙酰苯甲酰酯 5,15-Diacetyl-3-benzoyllathyrol 218916-52-0 20mg/支 欧当归内酯A Levistilide A 欧当归内酯 "分子式:C24H28O4 分子量:380 " 20mg/支 五味子丙素 Schisandrin C 61301-33-5 20mg/支 氢东莨菪碱 Scopolamine hydrobromide; Hyoscine hydrobromide 东莨菪碱氢盐 114-49-8 20mg/支 汉黄芩苷 Wogonoside 汉黄芩甙 51059-44-0 5mg/支 千层纸素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷 Oroxyloside 木蝴蝶素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷; 木蝴蝶素A-7-葡萄糖醛酸苷；千层纸素-7-葡萄糖醛酸苷 "分子式:C22H20O11 分子量:460.39" 20mg/支 黄独素B Diosbulbin B 黄独乙素；黄药子素B 20086-06-0 20mg/支 西贝母碱 Sipeimine 西贝素；西贝碱 61825-98-7 20mg/支 木蝴蝶苷A Oroxin A 木蝴蝶甙A "分子式:C21H20O10 分子量:432.38 " 20mg/支 木蝴蝶苷B Oroxin B 木蝴蝶甙B "分子式: C27H30O15 分子量:594.52 " 20mg/支 金石蚕苷 Poliumoside 金石蚕甙 94079-81-9 20mg/支 连翘酯苷B Forsythoside B 连翘酯甙B "分子式:C34H44O19 分子量:756.70 " 20mg/支 棕榈酸 Palmitic acid 1957-10-3 10mg/支 盐酸黄柏碱 Phellodendrine chloride 104112-82-5 人胫骨肉瘤细胞；U-2 OS10mg/支 化木兰花碱 Magnoflorine iodide 木兰花碱; 唐松草碱; 玉兰碱; 洋玉兰碱 2141-9-5 10mg/支 (-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷 (-)-Syringaresnol-4-O-β-D-apiofuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside 136997-64-3 20mg 人参皂苷Rgl 含量测定 常 操作方法:
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。
4. 37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。
(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟）
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |
