细胞名称 小鼠网织细胞肉瘤;M5076 形态特性 梭形 生长特性 半悬浮生长,贴壁细胞呈短梭形。 特征特性 该细胞来源于C57BL/6小鼠卵巢组织自发的网织细胞肉瘤,经细胞形态和功能鉴定后为巨噬细胞来源:该细胞具有吞噬活性;表达Fc受体,与绵羊红细胞形成玫瑰花环;对51Cr标记的红细胞具有抗体依赖的细胞毒反应;对同源小鼠肿瘤细胞(B16-F1)有巨噬细胞样的细胞毒作用,且不需要LPS的激活;没有NK细胞的活性;具有同小鼠腹腔巨噬细胞相当的溶菌酶、非特异性酯酶和磷酸酶的活性;超微结构显示该细胞内有吞噬小泡,缺乏紧密连接,这些特点都符合巨噬细胞的形态特征。核型分析显示该细胞为亚二倍体,因罗伯逊易位,>80%的染色体 培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15% HS 传代方法 1:2~1:3传代,3~4天1次。 传代情况 C3 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 培养法(-) STR - 同工酶 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF 促黄体生成素受体抗体IgG Anti-LH/Biotin 生物素标记抗人促黄体生成素抗体IgG Anti-L-HDC /FITC 荧光素标记L-组氨酸脱羧酶抗体IgG Anti-LHRH/GNRH /FITC 荧光素标记黄体激素释放激素抗体/促性腺激素释放激素抗体IgG Anti-LI-cadherin/FITC 荧光素标记肝肠钙粘连蛋白抗体IgG Anti-LIF /FITC 荧光素标记兔抗白血病抑制因子抗体IgG Anti-LIFR/FITC 荧光素标记抗白血病抑制因子受体抗体IgG Anti-LIMK1 /FITC 荧光素标记单丝氨酸蛋白激酶1抗体IgG Anti-Phospho-LIMK1 (Thr508)/LIMK2 (Thr505) /FITC 荧光素标记磷酸化单丝氨酸蛋白激酶1/2抗体IgG Anti-Lingo-1/FITC 荧光素标记Nogo受体作用蛋白抗体IgG Anti-LIR-6/CD85i/LILRA1/FITC 荧光素标记白细胞免疫球蛋白样受体6抗体IgG Anti-LILRB3/CD85a/PirB/FITC 荧光素标记白细胞免疫球蛋白样受体-B抗体IgG Anti-LIR-8/CD85c/LILRB5/FITC 荧光素标记白细胞免疫球蛋白样受体8抗体IgG Anti-LIS1/FITC 荧光素标记无脑回的致病基因LIS1抗体IgG Anti-Livin /FITC 荧光素标记一种新的凋亡抑制蛋白抗体IgG Anti-LIX1/FITC 荧光素标记LIX1抗体IgG Anti-LKB1/FITC 荧光素标记一种抑癌基因IgG Anti-phosphor-LKB1(Ser334)/FITC 0501 10mg 人参皂苷 Rb2 含量测定 111715-200802 20mg 1,5-O-二咖啡酰奎宁酸 含量测定 111717-200501 20mg 白屈菜红碱 含量测定 111718-200501 10mg 人参皂苷 Rf 鉴别 111719-200703 20mg 木犀草苷 含量测定 111720-200905 20mg 冬凌草甲素 含量测定 111721-200501 20mg 地肤子皂苷 Ic 含量测定 111723-200602 20mg 3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇 111724- 20mg 奇任醇 含量测定 111726-200601 20mg 胡黄连苷 I 含量测定 111727-200501 20mg 柳穿鱼叶苷 含量测定 111728-201001 20mg 哈巴苷 鉴别 111729-200603 20mg 哈巴俄苷 含量测定 111730-200605 20mg 秦皮素 含量测定 111731-200501 10mg 党参炔苷 鉴别 111732-200804 20mg 常春藤皂苷元 含量测定 111733-200904 20mg 紫蓳灵 含量测定 111734-200601 20mg 路路通酸 含量测定 111735-200501 小鼠网织细胞肉瘤;M507620mg 大豆苷 含量测定 111738-200501 20mg 7-羟基香豆素 含量测定 111739-200501 20mg 6,7-二甲氧基香豆素 含量测定 111740-200501 20mg 6-羟基-7-甲氧基香豆素 含量测定 1117 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |