细胞名称 小鼠肺腺癌低转移细胞；LA1-VAP33-GFP 形态特性 上皮样 生长特性 贴壁生长 特征特性 VAP33-GFP融合蛋白稳定过表达 培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS 传代方法 传代情况 冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS 支原体检测 培养法（-） STR - 同工酶 染色体 产品图片：
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用： 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名称： CD36
肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养（GB标准） 英文名称： KLK11
葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名称： CD97
哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用： 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验，还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称： NTRK3
血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用： 加入脱纤维羊血或兔血，制成血琼脂培养基，用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10－... 英文名称： HA
胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用： 可广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称： HA
Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用： 试剂A和试剂B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名称： SPARCL1
PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM琼脂。 英文名称： IL1RL1
李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名称： IL13RA1
李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名称： PECAM1
EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名称： TNF 100706-200401 依那普利双酮 对照品 HPLC检查 30mg 100707-200401 依那普利拉 对照品 HPLC系统适应性检查 30mg 100708-200401 对照品 原子吸收分光光度法含量测定用 100mg 100709-200501 兰索拉唑 对照品 含量测定（HPLC） 100mg 100711-200401 富马酸比索洛尔 对照品 HPLC法含量测定 100mg 100712-200401 马来酸氨氯地平 对照品 HPLC法含量测定 100mg 100714-200501 丁苯羟酸 对照品 含量测定（HPLC） 100mg 100715-200501 盐酸苯环壬酯杂质（N-甲基-3-氮苯双环（3,3,1）壬-9α醇） 对照品 检查（TLC） 50mg 100716-200501 盐酸苯环壬酯 对照品 含量测定（HPLC） 50mg 100717-200501 非洛地平 对照品 含量测定（UV） 100mg 100723-200401 酒石酸托特罗定 对照品 HPLC法含量测定 50mg 100724-200401 丁二酸(琥珀酸）洛沙平 对照品 TLC法鉴别 100mg 100725-200401 氟比洛芬 对照品 TLC法、HPLC法有关物质检查 50mg 100728-200501 盐酸阿唑嗪 对照品 含量测定（UV） 100mg 100729-200401 盐酸丁咯地尔 对照品 HPLC法含量测定 100mg 100730-200401 卡维地洛 对照品 HPLC法含量测定 100mg 100731-200401 阿维A 对照品 HPLC法含量测定 50mg 100732-200501 苯扎贝特 对照品 UV法含量测定 100mg 100733-200401 非诺贝特 对照品 UV法含量测定 50mg 100734-200401 苯甲酸甲硝唑 对照品 UV法含量测定 100mg 100735-200401 醋酸钠 对照品 HPLC法含量测定 50mg 100736-200401 葡萄糖酸钠 对照品 HPLC法含量测定 50mg 100737-200501 盐酸索他洛尔 对照品 含量测定（HPLC） 100mg 100741-200501 拉西地平 对照品 UV法含量测 记外周髓鞘蛋白-22IgG Anti-PMSA/FOLH1/FITC 荧光素标记前列腺特异膜抗原抗体IgG Anti-PMS2/FITC 荧光素标记肿瘤错配修复基因PMS2抗体IgG Anti-PLK1/STPK13/FITC 荧光素标记丝/苏氨酸蛋白激酶Plk1抗体IgG Anti-Phospho-PLK1 (Thr210)/FITC 荧光素标记磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶Plk1抗体IgG Anti-Podoplanin Protein/FITC 荧光素标记平足蛋白抗体IgG Anti-Pokemon/FITC 荧光素标记兔抗扑克蒙抗体IgG Anti-Polycystin 1/FITC 荧光素标记多囊肾蛋白1抗体IgG Anti-Polycystin 2/FITC 荧光素标记多囊肾蛋白2抗体IgG Anti-PP-1/FITC 荧光素标记蛋白磷酸酯酶-1抗体IgG Anti-PP-2A/FITC 荧光素标记蛋白质磷酸酶-2A抗体IgG Anti-PP-2A/FITC 荧光素标记蛋白质磷酸酶-2A抗体IgG Anti-PP2Ac/FITC 荧光素标记磷酸酯酶-2Ac抗体IgG Anti-PRL1/PTP4A1/FITC 荧光素标记肝再生磷酸酯酶1抗体IgG Anti-PRL3/PTP4A3/FITC 荧光素标记磷酸酯酶3蛋白抗体IgG 小鼠肺腺癌低转移细胞；LA1-VAP33-GFPAnti-PTPN4/MEG1/FITC 荧光素标记蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型4抗体IgG Anti-PPAR-delta /FITC 荧光素标记D型-过氧化酶活化增生受体抗体IgG Anti-PPAR alpha/FITC 荧光素标记α型-过氧化酶活化增生受体抗体IgG Anti-PPAR Gamma /FITC 荧光素标记过 操作方法:
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。
4. 37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。
(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟）
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |
