细胞名称 小鼠胚胎成纤维细胞;PA317 形态特性 成纤维细胞样 生长特性 贴壁生长 特征特性 PA317细胞株源自TK- NIH/3T3细胞,通过pBR322中的包装结构DNA(pPAM3)和pBR322中的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因共同转染构建而成。通过感染或转染将逆转录病毒载体导入这些细胞,生成可以感染许多哺乳动物细胞的双嗜性载体颗粒。这株细胞生成的病毒颗粒已成功地用于将基因导入人体。可能因为转入DNA丢失,能够包装逆转录病毒载体的PA317细胞百分比随传代而减少。在含0.03 mM 次黄, 0.001 mM 氨甲喋呤和0.02 mM 胸苷的培养基中短暂(大约5天)选择,可以选出保留了包装功 培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS 传代方法 1:3传代,2-3天传一代 传代情况 C17 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 阴性 STR STR鉴定 同工酶 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF 法含量测定用 100mg 100421-200401 磷酸氯喹 对照品 HPLC法含量测定用 100mg 100422-200501 盐酸异丙嗪 对照品 含量测定(HPLC) 100mg 100424-200301 盐酸普鲁卡因 对照品 HPLC法含量测定 50mg 100425-200301 维生素C 对照品 含量测定用 50mg 100426-200301 盐酸金刚烷胺 对照品 供鉴别用 50mg 100427-200301 盐酸溴己新 对照品 HPLC法含量测定用 50mg 100428-200401 美索巴莫 对照品 HPLC法含量测定用 50mg 100429-200401 氨苯蝶啶 对照品 HPLC法含量测定用 50mg 100430-200501 羟甲烟胺 对照品 UV法溶出度检查 100mg 100431-200401 尿囊素 对照品 含量测定 50mg 100432-200401 枸橼酸喷托维林 对照品 HPLC法含量测定 50mg 100433-200301 苯甲酸钠 对照品 HPLC含量测定 50mg 100434-200301 烟酸 对照品 HPLC法含量测定用 50mg 100438-200401 帕司烟肼(对氨基水杨酸异) 对照品 UV法溶出度检查 100mg 100439-200301 曲匹布通 对照品 UV法含量测定用 50mg 100440-200301 曲匹地尔 对照品 TLC法检查用 50mg 100441-200401 桂美酸 对照品 UV法溶出度检查 50mg 100442-200301 奥拉米特 对照品 UV法溶出度检查用 100mg 100444-200401 对羟基苯甲酸丙酯 对照品 HPLC检查 100mg 100446-200501 贝美格 对照品 含量测定(HPLC) 100mg 100452-200301 罗通定 对照品 HPLC含量 Anti-Phospho-EGFR(Tyr998) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化表皮生长因子受体抗体IgG Anti-EGF(mouse)/FITC 荧光素标记表皮生长因子抗体(小鼠)IgG Anti-HB-EGF/DTSF/FITC 荧光素标记肝素结合性表皮生长因子抗体IgG Anti-EGF/FITC 荧光素标记表皮生长因子抗体(大鼠)IgG Anti-EP3/FITC 荧光素标记前列腺素E受体3抗体IgG Anti-E.coli O6 (Escherichia coli O6)/HRP 辣根过氧化物酶标记抗大肠埃希杆菌O6抗体IgG Anti-E.coli DH-5 Alpha/FITC 荧光素标记抗DH5α大肠杆菌菌体蛋白抗体IgG Anti-E.coli DH-5 Alpha /HRP 辣根过氧化物酶标记抗DH5α大肠杆菌菌体蛋白抗体IgG Anti-E.coli O139/HRP 辣根过氧化物酶标记抗志贺毒素大肠杆菌O139抗体IgG Anti-E.coli O157/HRP 辣根过氧化物酶标记抗大肠埃希氏菌O157抗体IgG Anti-EPEC/E.coli /HRP 辣根过氧化物酶标记抗肠致病性大肠杆菌抗体IgG Anti-EPEC/E.coli/HRP 辣根过氧化物酶标记抗普通大肠埃希菌菌体蛋白抗体IgG Anti-E.coli/EPEC/FITC 荧光素标记抗普通大肠埃希菌菌体蛋白抗体IgG Anti-E.coli O6 (Escherichia coli O6)/FITC 荧光素标记大肠埃希杆菌O6抗体IgG Anti-E.coli O139/FITC 荧光素标记抗志贺毒素大肠杆菌O139抗体IgG Anti-E.coli O157/FITC 荧光素标记抗大肠埃希氏菌O157抗体IgG 小鼠胚胎成纤维细胞;PA317Anti-EPEC/E.coli /FITC 荧光素标记兔抗肠致病性大肠杆菌抗体IgG Anti-EphA1 R/FITC 荧光素标记抗EphA1-R受体抗体IgG Anti-EphA2 R/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠酪氨酸蛋白激酶受体A2抗体IgG Anti-Phospho-EphA2 (Tyr594) /FITC 荧 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |