细胞名称 小鼠黑色素瘤细胞；B16-F0 形态特性 上皮细胞样 生长特性 贴壁生长 特征特性 B16-Fo是一株小鼠黑丝素瘤细胞系。它可在体外常规传代培养，产生高浓度的黑色素。可用于分子生物学中黑色素基因的表达研究。 培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS 传代方法 1:3传代,2-3天传一代 传代情况 C24 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 阴性 STR 同工酶 同工酶鉴定 染色体 产品图片：
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用： 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名称： CD36
肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养（GB标准） 英文名称： KLK11
葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名称： CD97
哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用： 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验，还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称： NTRK3
血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用： 加入脱纤维羊血或兔血，制成血琼脂培养基，用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10－... 英文名称： HA
胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用： 可广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称： HA
Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用： 试剂A和试剂B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名称： SPARCL1
PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM琼脂。 英文名称： IL1RL1
李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名称： IL13RA1
李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名称： PECAM1
EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名称： TNF ，避光 130447-200501 65mg 2- 系统适应性 常温，避光 130448-200501 5g 辛烷磺酸钠 / 2-8℃，避光 130449- 200mg 诺氟沙星 含量测定 2-8℃，避光 130450-200705 200mg 环丙沙星 含量测定 2-8℃，避光 130451-200302 100mg 洛美沙星 含量测定 2-8℃，避光 130452-200902 200mg 依诺沙星 含量测定 2-8℃，避光 130453-9901 100mg 氧氟沙星 含量测定 2-8℃，避光 130454-200905 100mg 左氧氟沙星 含量测定 2-8℃，避光 130455-201005 100mg 氟罗沙星 含量测定 2-8℃，避光 130458-200902 100mg 培氟沙星 含量测定 2-8℃，避光 130459-200301 100mg 帕珠沙星 含量测定 2-8℃，避光 130460-200701 200mg 司帕沙星 含量测定 2-8℃，避光 130461-200501 200mg 头孢曲松 含量测定 2-8℃，避光 130480-200903 200mg 头孢克洛 含量测定 2-8℃，避光 130481-200904 500mg 苯唑西林 含量测定 2-8℃，避光 0482-9901 200mg 头孢噻肟 含量测定 2-8℃，避光 130483-200904 200mg 多西环素 含量测定 2-8℃，避光 0485-9901 100mg 克林霉素磷酸酯 含量测定 2-8℃，避光 130486-200803 200mg 盐酸四环素 含量测定 2-8℃，避光 130488-200403 200mg 盐酸金霉素 含量测定 2-8℃，避光 130489-200202 100mg 青霉素V 含量测定 2-8℃，避光 130490-200904 100mg 舒他西林 含量测定 2-8℃，避光 130491-200102 200mg 头孢呋辛酯 含量测定 2-8℃，避光 130492-200402 100mg 头孢呋辛 含量测定 2-8℃，避光 130493-200704 50mg 头孢克洛δ-3异构体 HPLC系统适用 2-8℃，避光 130494-200903 100mg 环孢素 含量测定 2-8℃，避光 130495-2 Anti-ECE1/FITC 荧光素标记内皮素转化酶1抗体IgG Anti-ECE2/FITC 荧光素标记抗内皮素转化酶2抗体IgG Anti-ECG2/FITC 荧光素标记食道癌相关基因抗体IgG Anti-ECM1/FITC 荧光素标记细胞外基质蛋白1抗体IgG Anti-ECP/FITC 荧光素标记抗嗜酸性粒细胞阳离子蛋白抗体IgG Anti-ED-1/FITC 荧光素标记外胚层发育不良抗体IgG Anti-EDG4/LPA2/FITC 荧光素标记溶血磷脂酸受体蛋白2抗体IgG Anti0-EDG6/SLP4 /FITC 荧光素标记内皮细胞的分化蛋白6抗体IgG Anti-EDG7/LPA3/FITC 荧光素标记溶血磷脂酸受体蛋白3抗体IgG Anti-EDNR-A/FITC 荧光素标记抗内皮素受体A抗体IgG Anti-EF1a/FITC 荧光素标记延伸因子EF-1a抗体IgG Anti-EEF2/FITC 荧光素标记真核翻译延长因子2抗体IgG Anti-EEF2k/FITC 荧光素标记真核延伸因子激酶2抗体IgG Anti-EGF/FITC 荧光素标记表皮生长因子抗体IgG Anti-EGF-R/FITC 荧光素标记表皮生长因子受体抗体IgG Anti-EGFR/FITC 荧光素标记表皮生长因子受体抗体IgG Anti-EGFRvIII/FITC 荧光素标记表皮生长因子受体III型突变体抗体IgG Anti-EGFR/PE 荧光素PE标记表皮生长因子受体抗体IgG Anti-EGFR /Gold 金标记表皮生长因子受体抗体IgG Anti-Phospho-EGFR(Ser1046/1047) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化表皮生长因子受体小鼠黑色素瘤细胞；B16-F0抗体IgG Anti-Phospho-EGFR(Thr669) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化表皮生长因子受体抗体IgG Anti-Egr-1/FITC 荧光素标记早期反应基因-1/应急反应生长基因1抗体IgG Anti-eIF2 alpha/FITC 荧光素标记真核启动因子2 操作方法:
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。
4. 37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。
(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟）
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |
