细胞名称 小鼠淋巴结血管上皮细胞;F-2B 形态特性 上皮样 生长特性 贴壁生长 特征特性 培养条件 传代方法 传代情况 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 阴性 STR 同工酶 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF 20mg/支 胰岛素(猪) 效价测定 -20℃,避光 504-8708 20mg/支 猪胰岛素(高纯〕 效价测定 -20℃,避光 150505-9609 约2.5g 葡萄糖酸锑钠 效价测定 2-8℃,避光 150506-8906 25mg/支 磷酸组胺 检查用 2-8℃,避光 150510-200412 60IU/支 绒促性素 效价测定 -20℃,避光 150513-200409 20mg/支 毒毛旋花子苷G 效价测定 2-8℃,避光 150514-870405 2.2μg/支 猪胰岛素原 试剂盒测试 -20℃,避光 523-8901 FSH190IU、LH242IU/支 人绝经尿促性素(HMG) 效价测定 -20℃,避光 150524-200503 21IU/支 缩宫素(合成) 效价测定 -20℃,避光 050529-200902 600μIU 促甲状腺素(TSH) 免疫测定用 -20℃,避光 150530-0312 930mIU 促黄体生成激素(LH) 免疫测定用 -20℃,避光 150531-201003 9mIU/支 泌乳素 免疫测定用 -20℃,避光 150532-0004 450mIU/支 促卵泡生成素 免疫测定用 -20℃,避光 150533-0212 1.22mIU/0.61ug/支 生长激素 免疫测定用 -20℃,避光 534-9604 240ng/0.5ml/支 人绒毛膜促性腺激素β亚单位 免疫测定用 -20℃,避光 150535-201002 14.2μg/支 人胎盘泌乳素(HPL) 免疫测定用 -20℃,避光 150536-9903 2ug/支 铁蛋白 免疫测定用 -20℃,避光 540-9410 320ng/支 癌胚抗原 免疫测定用 -20℃,避光 150541-0210 800ng/661IU/支 甲胎蛋白 免疫测定用 -20℃,避光 150542-0004 150ng/支 前列腺特异抗原 免疫测定用 -20℃,避光 150543-0004 0.5ml/支 游离前列腺特异抗原 免疫测定用 -20℃,避光 150544-200702 50ng/支 三品 甲腺原氨酸 免疫测定用 -20℃,避光 150550-0004 1000ng/支 甲状腺素 免疫测定用 -20℃,避光 150551-0004 23ng/支 反三品 甲腺原氨酸 免疫测定用 -20℃,避光 150552-0004 21ng/支 人胰岛素C-肽 免疫测定用 -20℃,避光 150553-9911 19ng/支 胰高血糖素 免疫测定用 -20℃,避光 150554-9604 22.8IU/支 人绒毛膜促性腺激素 免疫测定用 -20℃,避光 150555-9003 4000IU/支 抗甲状腺球蛋白抗体 免疫测定用 -20℃,避光 150556-200601 430IU/支 抗甲状腺过氧化物酶抗体 免疫测定用 -20℃,避光 150557-200601 10000EU/支 细菌内毒素 检查 -20℃,避光 150600-200707 10支/盒 细菌内毒素(工作品) 检查 -20℃,避光 150601-201072 1mg/支 细菌内毒素(精品) 可用于建立动物发热模型 -20℃,避光 150602-200502 20mg 06-单乙酰吗啡盐酸盐 20mg O3-单乙酰吗啡氨基磺酸盐 含量测定 171208-200609 20mg 乙酰可待因 含量测定 171209-200507 100mg 那可丁 含量测定 171224-200403 100mg 氯 含量测定 自取 171227-200302 100mg 2-氨基-2’-氯-5-硝基二苯酮 检查 171228-200602 20mg 盐酸甲基爱康宁 小鼠淋巴结血管上皮细胞;F-2B20mg 苯甲酰爱康宁 含量测定 171233-200606 20mg 盐酸 含量测定 自取 171244-200704 20mg 盐酸洛非西定 含量测定 171246-200301 20mg 盐酸纳曲酮 含量测定 171249-2 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |