细胞名称 小鼠杂交瘤细胞;10F7 形态特性 淋巴母细胞样 生长特性 半贴壁生长 特征特性 该细胞属保藏,其特征特性尚未公开。 培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS 传代方法 1:3传代,3-4天传1次 传代情况 C5 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 阴性 STR 同工酶 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF edium,Modified 改良V-P培养基 250 用于蜡样芽孢杆菌的溶血测试验(SN标准) Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base 胰酪胨大豆羊血琼脂基础 250 用于蜡样芽孢杆菌的酪蛋白分解试验 (GB标准) Casein Agar 酪蛋白琼脂 250 用于蜡样芽孢杆菌葡萄糖分解试验(SN标准) Phenol Red Dextrose Broth 酚红葡萄糖肉汤 250 用于蜡样芽孢杆菌明胶液化试验 木糖-明胶培养基 250 用于腊样芽胞杆菌选择性分离培养 Bacilus Cereus Selective Agar Base 腊样芽胞杆菌选择琼脂基础 250 用于食品中腊样芽胞杆菌鉴定和计数(APHA方法) Dextrose Casein-peptone Agar 葡萄糖酪胨琼脂 250 加入250ml TSC琼脂基础中 D-环丝氨酸 0.1g/支*2 用于产气荚膜梭菌的产芽孢培养 Sporulation Broth 产芽孢肉汤 250 用1ml无菌水溶解后添加于100ml HB0256中 Polymyxin B 多粘菌素B 1.2mg/支*5 用于产气荚膜梭菌的培养(SN标准) Poly Peptone Yeast Extract Medium 多价蛋白胨-酵母膏 (PY) 培养基 250 加入牛肉粒,用于肉毒梭菌及厌氧梭状芽孢杆菌的检验(GB标准) Cooked Meat Medium Base 疱肉培养基基础 250 加入疱肉基础中,配成疱肉培养基 Dried Meat Particle 疱肉牛肉粒 100 用于肉毒梭菌、产气荚膜梭菌的分离培养(GB标准) Egg Yolk Agar Base 卵黄琼脂培养基基础 250 用于产气荚膜梭菌的牛奶发酵试验 含铁牛奶培养基 250 用于干燥食品的计数和培养(MERCK方法) Differentia Clostridial Agar 梭菌鉴别琼脂(DCA) 250 用于食品和其它物质中梭菌的计数和培养(MERCK方法) Differentia Reinforced Clostridial Agar 强化梭菌鉴别琼脂(DRCA) 250 用于梭菌的分离培养(MERCK方法) Reinforced Clostridium Agar 强化梭菌琼脂 250 用于梭菌的分离培养(Merck方法) Reinforced Clostridium Medium 强化梭菌培养基(RCM) 250 用于产气荚膜梭菌的平板计数(Merck方法) TS 性分离(GB、SN标准) Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Agar 胆硫乳琼脂(DHL) 250 生化培养基,用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选(GB、SN标准) Triple Sugar Iron Agar 三糖铁琼脂(TSI) 250 用于沙门氏菌,志贺氏菌的选择性分离培养(GB标准) Salmonella Shigella Agar SS 琼脂 250 用于亚利桑那沙门氏菌的选择性分离(SN标准) Salmonella Arizona Agar 亚利桑那菌琼脂(SA) 100 用于沙门氏菌的选择性增菌培养(GB标准) Rappaport-Vassiliadis Mdeium 氯化镁孔雀绿肉汤(MM,RV Medium) 250 用于沙门氏菌的选择性分离培养(FDA标准) Hektoen Enteric Agar HE 琼脂(HE) 250 生化培养基,赖氨酸脱羧酶试验(GB、SN标准) Lysine-decarboxylase Test Broth 赖氨酸脱羧酶培养基 5 生化培养基,用于细菌脲酶检测(GB、SN标准) Urease Agar Base 尿素酶琼脂基础 250 加入尿素酶琼脂基础 40%Urea Water 40%尿素水 5ml*10 生化培养基,用于细菌V-P试验(SN标准) Voges-Proskauer Semisolid Agar V-P 半固体琼脂 250 生化培养基,用于细菌靛基质试验,亦称色氨酸肉汤(SN标准) Indole Medium 吲哚培养基 10 吲哚(靛基质)试验配套试剂 Kovacs氏靛基质试剂盒 10ml*1 生化培养基,用于细菌丙二酸盐利用试验(GB、SN标准) Malonate Broth 丙二酸钠培养基 10 生化培养基,用于细菌卫予醇发酵试验(SN标准) Dulcitol Semisolid Agar 卫矛醇半固体琼脂 10 主要用于志贺氏菌的增菌培养,亦可用于沙门氏菌增菌培养(GB标准) Gram Negative Enrichment Broth GN 增菌液 250 选择性培养基,主要用于分离志贺氏菌属,亦可用于分离沙门氏菌(FDA标准) Xylose Lysine Desoxycholate Medium XLD 培养基 250 用于沙门氏菌的选择性分离(GB标准) WS Salmonella Agar WS 琼脂 250 用于志贺氏菌的葡萄糖铵试验(GB标准) Ammonium Dextrose Medium 葡萄糖铵培养基 250 用于志贺氏菌的复合生化试验(GB标准) Dextrose Semisolid Medium 葡萄糖半固体培养基 250 用于细菌的复合生化试验 Motility Indol Urea Medium Base 动力-吲哚-尿素培养基基础(MIU) 250 用于硫化氢试验 Lead Acetate Medium 醋酸铅培养基 250 用于硫化氢、动力、吲哚试验 Hydrogen Sulfide Indole Motility Medium SIM培养基 250 小鼠杂交瘤细胞;10F7用于食品中沙门氏菌检验前增菌 Lactose Broth 乳糖肉汤 250 用于滤膜法检测食品中沙门氏菌(SN/T1059.1) EF-18 Agar EF-18 琼脂 250 使用前,每支加入100mlHB4153中 Novobiocin Sodium Salt 新生霉素 1.5mg/支*5 用于食品中沙门氏菌检验选择性增菌(ISO标准) 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |