细胞名称 小鼠杂交瘤细胞;4D1 形态特性 淋巴母细胞样 生长特性 半贴壁生长 特征特性 该细胞属保藏,其特征特性尚未公开。 培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS 传代方法 1:3传代,3-4天传1次 传代情况 C5 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 阴性 STR 同工酶 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF 基础,传代用.也可用于消毒效果测定 Nutrient Agar 营养琼脂(NA) 250 用于环氧乙烷消毒和电离辐射消毒过程监测指示菌(枯草杆菌黑色变种芽孢及短小杆菌芽孢)的培养(GB标准) 0.5% Dextrose Broth 0.5%葡萄糖肉汤培养基 250 用于压力蒸气消毒过程监测指示菌(嗜热脂肪杆菌芽孢)的培养及消毒效果测定 Glucase Peptone Water Medium 溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基 250 用于真菌、酵母菌增菌 Liquid Sabourand Medium 液体沙氏培养基 250 用于一次性使用卫生用品中溶血性链球菌的检验 Pick’s Broth Base B 匹克氏肉汤基础B 250 用于食品中乳酸菌总数测定 Tomato Juice Agar,Modified 改良番茄汁培养基 250 用于食品中乳酸菌总数测定 Chalmers Agar ,Modified 改良MC培养基 250 用于食品中乳酸菌总数测定 MRS Agar Base MRS 琼脂基础 250 LBS agar LBS 琼脂 用于牛奶和乳制品中乳酸菌检测和分离培养(Merck方法) M17 Agar M17琼脂 250 用于牛奶和乳制品中乳酸菌检测和分离培养(Merck方法) M17 Broth M17肉汤 250 用于乳酸菌检测和分离培养(ACUMEDIA) Lactobacillus Selective Agar 乳酸杆菌选择性琼脂 250 用于乳酸菌分离培养 APT Agar APT 琼脂 250 用于双歧杆菌分离培养 双歧杆菌BS培养基 250 用于双歧杆菌分离培养(GB标准) BL medium BL琼脂培养基 250 用于双歧杆菌分离培养(GB标准) BBL medium BBL琼脂培养基 250 用于双歧杆菌分离培养(GB标准) TPY medium TPY琼脂培养基 250 用于双歧杆菌增菌培养,使用时需加入氯化血红素和维生素K1(GB标准) PYG Broth Base PYG 液体培养基基础 250 用于单增李氏菌增菌培养(SN、GB标准) Trypticase Soy-Yeast Extract Broth 胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤(TSB-YE) 250 每支添加于225ml HB4150、HB4192中(SN、GB标准) 萘啶酮酸 10mg/支*5 添加于225ml HB4160中制成LB1 4.5mg*5 添加于225ml HB4160中制成LB1 4.0mg*5 每支添加于225ml HB4150、HB4192中 精氨酸双水解酶试验用培养基(AD) 5 用于霍乱弧菌选择性分离培养 Gentamycin Agar 庆大霉素琼脂 250 用于霍乱弧菌选择性分离培养,灭菌冷至50℃加入亚碲酸钾,倒平板 No.4 Agar Base 四号琼脂基础 250 用于神奈川现象试验(SN标准) Wagstsuma Agar Base 我妻氏培养基基础 250 用于副溶血性弧菌的前增菌培养 60%/L NaCl Peptone Water 60%/L氯化钠蛋白胨肉汤 250 用于副溶血性弧菌的生化反应筛选(SN标准) NaCl Triple Sugar Iron Agar 氯化钠三糖铁 250 培养副溶血性弧菌,做细胞色素氧化酶实验(SN标准) Tryptic Soy Agar 胰胨大豆琼脂斜面(TSA) 250 用于副溶血性弧菌42℃生长试验 42℃growth Medium 42℃生长培养基 250 用于鉴别弧菌葡萄糖代谢类型(发酵型或氧化型)(SN标准) O/F Medium O/F培养基(HLGB) 250 用于副溶血性弧菌的选择性增菌培养(GB标准) Sodium Chloride Violet purple Enrichment Broth 氯化钠结晶紫增菌液 250 用于副溶血性弧菌的选择性分离培养(GB标准) Sodium Chloride Sucrose Agar 氯化钠蔗糖琼脂 250 用于副溶血性弧菌的选择性分离培养(GB标准) Halophilic Bacteria Selective Agar 嗜盐菌选择性琼脂 250 用于副溶血性弧菌的溶血试验 Sodium Chloride Blood Agar Base 氯化钠血琼脂基础 250 用于霍乱弧菌的生化试验(SN标准) 霍乱双糖铁琼脂(KIA) 250 用于霍乱弧菌的培养(SN标准) T1N1 Agar T1N1 琼脂 250 用于霍乱弧菌的生长试验(SN标准) T1N0 Broth T1N0 肉汤 250 小鼠杂交瘤细胞;4D1用于霍乱弧菌的生长试验(SN标准) T1N3 Broth T1N3 肉汤 250 用于霍乱弧菌的复合生化试验(SN标准) Arginine Dextrose Agar 精氨酸葡萄糖斜面琼脂 100 用于弧菌分离培养(FDA标准) mCPC Medium mCPC 培养基 250 每瓶添加于100ml mCPC培养基中 mCPC Me 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |