细胞名称 小鼠杂交瘤细胞;3H5 形态特性 淋巴母细胞样 生长特性 半贴壁生长 特征特性 该细胞属保藏,其特征特性尚未公开。 培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS 传代方法 1:3传代,3-4天传1次 传代情况 C8 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 阴性 STR 同工酶 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF 卫矛醇半固体琼脂 细菌卫矛醇发酵试验 250克 NO.4 Agar Base 四号琼脂 霍乱弧菌选择性分离培养 250克 Wagstsuma Agar Base 我妻氏血琼脂培养基基础 用于副溶血性弧菌的溶血试验 250克 L Nac1 Peptone Water 60%/L氯化钠蛋白胨肉汤 副溶血性弧菌的前增菌培养 250克 42℃ Growth Medium 42℃生长培养基 副溶血弧菌42℃生长试验 250克 Casein Agar Medium 水解酪蛋白琼脂 用于鉴别蜡样芽孢杆菌分解酪蛋白试验 250克 Ammonium Dextrose Medium 葡萄糖铵培养基 志贺氏菌的葡萄糖铵试验 250克 Dextrose Semisolid Medium 葡萄糖半固体发酵管 用于志贺氏菌的生化试验 250克 Kilgler Iron Agar 克氏双糖铁琼脂 细菌复合生化试验 250克 Phosphate Glucose Peptone Water 磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基 用于甲基红试验 100克 Korser Citrate Sodium Broth KORSER氏柠檬酸盐肉汤 用于细菌的枸橼酸盐试验 250克 VRBA 结晶紫中性红胆盐琼脂 用于大肠菌群的检验 250克 Salmonella Arizona Agar SA琼脂 亚利桑那沙门氏菌的选择性分离 250克 Azide Dextrose Broth 叠氮钠葡萄糖肉汤 链球菌、肠球菌、粪链球菌的增菌培养 100克 KF Streptococcus Agar KF链球菌琼脂 链球菌的选择性分离和计数 250克 EVA Broth EVA肉汤 用于链球菌的增菌培养 250克 LIM Medium 赖氨酸吲哚动力培养基 用于链球菌的分离培养;细菌的赖氨酸、吲哚和动力复合生化试验 250克 BETA-SSA Agar BETA-SSA琼脂 链球菌的选择性分离培养 250克 Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base 胰酪胨大豆羊血琼脂基础 蜡样芽孢杆菌的溶血测试验 250克 V-P Medium Modified 改良V-P培养基 蜡样芽孢杆菌的溶血试验 250克 R-2A Agar R2A琼脂 饮用水中导生细菌分离培养 250克 A1 Medium A1培养基 检测水中的大肠菌群 250克 Yeast Extract Agar 酵母提取物琼脂 水中细菌总数的检测 250克 Lactose Peptone Broth 乳糖蛋白胨肉汤 饮用水中总大肠菌群多管发酵法检验 250克 Cary-Blair Transfort Medium Cary-B fied 改良MC乳酸菌琼脂培养基 用于食品中乳酸菌总数的测定 250克 MRSA MRS琼脂 用于食品中乳酸菌的培养 250克 MRS Lactotacillus Agar Modified 改良MRS琼脂培养基 乳酸菌的测定,双歧杆菌和嗜酸乳酸菌的计数 250克 UBA Medium UBA培养基 啤酒中厌氧菌检测 250克 NBB Agar NBB琼脂 啤酒中厌氧菌检测 250克 Raka-Ray Medium 乳酸菌选择性培养基 啤酒中乳酸菌检测和分离培养 250克 LBS Agar 乳酸菌选择性琼脂 用于乳酸杆菌的检测 250克 APT Agar 多功能吐温琼脂 乳酸菌分离培养 250克 PYG Broth Base PYG液体培养基基础 双岐杆菌增菌培养 250克 Cooked Meat Medium Base 疱肉培养基基础 用于厌氧菌的分离培养 250克 7.5% Sodium Chloride Broth 7.5%氯化钠肉汤 金黄色葡萄球菌选择性增菌 250克 Baird Parker Agar Base 贝尔德-帕克琼脂基础 用于金黄色葡萄球菌的分离培养 250克 Meat Infusion Broth 肉浸液肉汤 溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养 20克 MUGal Broth MUGal肉汤 用于多管发酵法快速检测大肠菌群 100克 Buffered MUG Agar 缓冲4-甲基伞形酮葡糖苷酸琼脂 滤膜MUG法检测食品中大肠菌数 250克 Tergitol-7 Agar Tergitol-7琼脂 大肠菌群的鉴定 250克 Standard Ⅰ Nutrient Agar 标准1号营养琼脂 标准细菌计数,含糖 250克 Standard Ⅱ Nutrient Agar 标准2号营养琼脂 不含糖,可作血琼脂基础和传代用 小鼠杂交瘤细胞;3H5250克 Tryptic Soy Fast Green Agar 胰蛋白胨大豆快绿琼脂 滤膜细菌总数的测定和分离培养 250克 M-TGE Broth M-TGE肉汤 奶制品中滤膜细菌计数 250克 Acetate Agar 乙酸盐琼脂 细菌醋酸盐试验 250克 BHI 无琼脂脑心浸液 用于金黄色葡萄 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |