细胞名称 抗人单抗杂交瘤细胞;B4B5C5 形态特性 淋巴母细胞样 生长特性 半贴壁生长 特征特性 可产生抗人EIFIAY的单克隆抗体。 培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS 传代方法 1:3传代,2-3天传一代 传代情况 C30 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 阴性 STR 同工酶 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF 含糖牛肉汤琼脂培养基 250g/瓶 用于乳酸菌计数 LAMVAB 琼脂基础 250g/瓶 用于乳酸杆菌的分离,每 100ml 培 养基中添加 1 支 21501 苛养厌氧菌肉汤 250g/瓶 用于厌氧菌的增菌培养,含 0.075%琼脂 碎肉肉汤基础 250g/瓶 用于厌氧菌特别是专性厌氧菌的 培养、增菌和修复,含维生素 K, 需添加 11002(庖肉牛肉粒) 碎肉葡萄糖肉汤基础 250g/瓶 用于厌氧菌特别是专性厌氧菌的 培养、增菌和修复,含维生素 K, 需添加 11002(庖肉牛肉粒) 碎肉碳水化合物肉汤基础 250g/瓶 用于厌氧菌特别是专性厌氧菌的 培养、增菌和修复,含维生素 K, 需添加 11002(庖肉牛肉粒) 普通啤酒琼脂培养基 250g/瓶 用于啤酒菌、厌氧菌的检测 改良 NBB 琼脂基础 250g/瓶 用于啤酒中厌氧菌的检测 需氧-厌氧菌琼脂培养基 250g/瓶 用于灭菌与消毒鉴定试验 AN 厌氧琼脂基础 250g/瓶 厌氧基础培养基,每 100ml 培养基 中添加 1 支 21004 和 1 支 21005 Wilkins-Chalgren 琼脂 250g/瓶 用于厌氧菌的分离培养 厌氧菌肉汤 250g/瓶 用于肉汤微量稀释法测定厌氧菌 敏感性试验培养,也可用于厌氧菌 培养 CDC 厌氧菌琼脂基础 250g/瓶 用于厌氧菌的分离培养,每 100ml培养基中添加 1 支 21004 和 1 支21005,并添加 5%~10%50701 厌氧菌琼脂 250g/瓶 用于厌氧菌的分离培养 Schaedler 琼脂 250g/瓶 用于厌氧菌的分离培养,视情况加 入 VK1 和脱纤维羊血 Schaedler 肉汤 250g/瓶 用于厌氧菌的增菌 CHO 培养基 250g/瓶 加入不同碳源用于厌氧菌的鉴别 试验 厌氧基础肉汤 250g/瓶 用于厌氧微生物,尤其是拟杆菌和 其它苛养厌氧菌的培养 厌氧基础琼脂 250g/瓶 用于厌氧微生物,尤其是拟杆菌和 其它苛养厌氧菌的培养,灭菌后需 添加 5-10%脱纤维羊血 GAM 肉汤 250g/瓶 用于厌氧菌的培养,若需要,每100ml 培养基中可选择性添加添加1 支 21004 和 1 支 21005 GAM 半固体培养基 250g/瓶 用于厌氧菌的保存,若需要,每100ml 培养基中可选择性添加 1 支21004 和 1 支 21005 GAM 琼脂 250g/瓶 用于厌氧菌的培养,若需要,每100ml 培养基中可选择性添加 1 支21004 和 1 支 21005 改良 GAM 肉汤基础 250g/瓶 用于厌氧菌培养,每 100ml 培养基 中添加 21004、21005,可选择性添 加 21006、21007、21008 各 1 支 改良 GAM 琼脂基础 250g/瓶 用于厌氧菌培养,每 100ml 培养基 中添加 21004、21005,可选择性添 加 21006、21007、21008 各 1 支 BDS 培养基 250g/瓶 用于培养拟杆菌 拟杆菌胆汁七叶苷琼脂基础(BBE) 250g/瓶 用于脆弱拟杆菌的快速分离,每100ml 培养基中添加 2 支 21004 和5 支 20102 肉浸液肉汤 250g/瓶 用于蜡样芽胞杆菌的纯培养 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础(MYP) 250g/瓶 用于蜡样芽胞杆菌的计数、分离, 每 100ml 培养基中添加 1 支 21001 和 1 支 21201 酪蛋白琼脂 250g/瓶 用于蜡样芽胞杆菌的酪蛋白分解 试验 酚红葡萄糖肉汤 250g/瓶 用于葡萄糖分解试验 溶菌酶营养肉汤基础 250g/瓶 用于蜡样芽胞杆菌的溶菌酶试验, 每 200ml 培养基中加入 1 支 21209 胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础TSPB 250g/瓶 用于蜡样芽胞杆菌 MPN 试验,每15ml 培养基中添加 0.1ml21204 嗜热脂肪杆菌恢复琼脂培养基 250g/瓶 用于灭菌与消毒鉴定试验 TGY 肉汤培养基 250g/瓶 用于芽孢菌的培养 TGY 琼脂培养基 250g/瓶 用于芽孢菌的培养 芽孢杆菌培养基 250g/瓶 用于芽孢杆菌的保藏 溴甲酚紫琼脂(BPA) 250g/瓶 用于嗜热芽孢菌芽孢计数 锰盐营养琼脂 250g/瓶 用于芽孢杆菌的培养 葡萄糖胰蛋白胨琼脂 250g/瓶 用于嗜热菌芽孢计数 葡萄糖蛋白胨琼脂(DT) 培养基 250g/瓶 用于需氧芽孢杆菌计数 DTA 培养基 250g/瓶 用于乳与乳制品中嗜热需氧芽孢 数的测定 NGKG 琼脂基础 250g/瓶 用于食品中蜡样芽胞杆菌的检测, 每 200ml 培养基中添加 2 支 21001 和 1 支 21201 胰蛋白胨酵母浸粉肉汤ISP Medium 1(Tryptone Yeast Extract Broth) 250g/瓶 用于链霉菌属的培养鉴定 高氏合成一号琼脂培养基 250g/瓶 用于放线菌的培养 酵母膏-麦芽膏琼脂ISP Medium 2(Yeast Extract Malt Extract Agar) 250g/瓶 用于链霉菌属的培养鉴定 无机盐淀粉琼脂ISP Medium4(Inorganic Salts-Starch Agar) 250g/瓶 用于链霉菌属的培养鉴定 抗人单抗杂交瘤细胞;B4B5C5甘油天门冬素琼脂基础ISP Medium 5( Glycerol Asparagine Agar Base) 250g/瓶 用 于 链 霉 菌 属 的 培 养 鉴 定 , 每100ml 培养基中需添加 1 支 21702(甘油) 酪氨酸琼脂培养基 250g/瓶 用于链霉菌属的培养鉴定,每升培 养基中需添加 15.0g 甘油 黄豆粉液体培养基 250g/瓶 用于放线杆菌的培养 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |