细胞名称 病毒转化的人B淋巴细胞;KM0501 形态特性 淋巴母细胞样 生长特性 悬浮生长 特征特性 该细胞来源于一正常男性的外周血。2005年由中国科学院昆明细胞库通过EB病毒转化的方法建立。 培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS 传代方法 1:2传代;5-6天一次 传代情况 P7 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 荧光法(-) STR Amelogenin:XY;D8S1179:14,16;D21S11:30,33.2;D7S820:11,12;CSF1PO:10;D3S1358:17;TH01:7, 9;D13S317:8,12;D16S539: 11,12;D2S1338:,17,20;D19S433:13,14;vWA:19;THOX:8;D18S51:14,15;D5S818:10,11 ;FGA:24。 同工酶 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF 10g 可溶性淀粉 效价测定 140602-200313 200IU/支 玻璃酸酶 效价测定 140603-200609 1280IU/支 尿激酶(UK) 供尿激酶效价测定用试剂 140604-200623 190BP/支 凝血酶(牛血) 供尿激酶效价测定用 140605-200424 10U/支 纤维蛋白溶酶原(牛血) 供尿激酶效价测定用试剂 140606-201024 98.9mg/支 纤维蛋白原(牛血) 供尿激酶效价测定用 140607-200736 5g 牛血红蛋白 供尿激酶效价测定用试剂 140608-201014 100mg L-酪氨酸 效价测定 140609-200711 15mg 溶酶小球菌底物 效价测定 140610-200612 50mg 辅酶 Q10 含量测定 140611-200803 1.5g 牛胆盐 效价测定 140612-200506 41U/支 磷酸转乙酰化酶 供辅酶A效价测定用标准试剂 140613-200644 300mg 乙酰磷酸二锂盐 效价测定用标准底物 140614-200613 0.1g 胰蛋白酶 效价测定 140615-200206 约3mg 蛋白低分子量标准(SDS法) 分子量测定 140618-200302 13.7mg/200919 血清白蛋白(牛) 蛋白含量测定 140619-200919 64Iu/支 降纤酶 效价测定 140620-200301 46Iu/支 胰激肽原酶(猪胰激肽释放酶) 效价测定 140621-200906 0.2ml冻干粉 肠膜状明串珠菌 供右旋糖酐用 140622-200610 / 粪肠球菌 供乳酶生用 140623-200708 每支100mg 十八种氨基酸(套) 含量测定 140624-200805 560IU/支 凝血酶 效价测定 140625-201009 凝固物含量59% 纤维蛋白原(牛血) 供凝血酶测定用 140626-201009 约25mg/支 利巴韦林 含量测定 140629-200202 alanyl tRNA synthetase 2) 成骨特异性转录因子抗体 Anti-CBFA1/RUNX2 (Runt-related Transcription Factor 2) 程序性死亡配体1抗体 Anti-B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1) 程序性死亡配体2抗体 Anti-B7-DC/PDL2/CD273(programmed death ligand 2) 刺激分子B7-1蛋白抗体 Anti-CD80/B7-1 促肾上腺皮质激素(1-39)抗体 Anti-ACTH (Adrenorticotrophin hormons 1-39) 促肾上腺皮质激素(18-39)抗体 Anti-ACTH (Adrenorticotrophin hormons 18-39) 促肾上腺皮质激素(7-23)抗体 Anti-ACTH (Adrenorticotrophin hormons 7-23) 胆囊收缩素抗体/缩胆囊素抗体(八肽) Anti-CCK8(Cholecystokinin-8) 胆汁酸盐输出泵蛋白抗体 Anti-BSEP(Bile salt export pump) 蛋白磷酸酯酶-2B催化亚单位抗体 Anti-Calcineurin α /PP-2B alpha 1 淀粉样肽前体蛋白抗体 Anti-APP695/770(Amyloid protein precursor 695/770 ) 凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制剂抗体 Anti-AVEN(apoptosis, caspase activation inhibitor) 凋亡蛋白活性因子-1抗体(C端) Anti-Apaf-1(Apoptosis protease activating factor-1)(CT) 凋亡蛋白活性因子-1抗体(N端) Anti-Apaf-1(Apoptosis protease activating factor-1)(NT) 调节活化的正常T细胞表达和分泌的因子(趋化因子) Anti-CCL5/RANTES(regulated on activation normal T cell expressed and secreted) 调亡诱导因子抗体 Anti-AIF(Apoptosis-Inducing Factor) 丁酰胆碱脂酶抗体(C端) Anti-BCHE(butyrylcholinesterase)CT 丁酰胆碱脂酶抗体(N端) Anti-BCHE(butyrylcholinesterase)NT 多配体蛋白聚糖1抗体 Anti-CD138/Syndecan-1 病毒转化的人B淋巴细胞;KM0501 反应性溶血膜抑制蛋白抗体 Anti-CD59/potectin 芳香化酶/细胞色素P450/雌激素合成酶抗体 Anti-Aromatase (Cytochrome p450 19A1; Estrogen synthetase) 芳香化酶抗体 Anti-Aromatase (Cyt 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |