细胞名称 病毒转化的人B淋巴细胞;KM9801 形态特性 淋巴母细胞样 生长特性 悬浮生长 特征特性 该细胞来源于一正常男性的外周血。1998年由中国科学院昆明细胞库通过EB病毒转化的方法建立。 培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS 传代方法 1:2传代;5-6天一次 传代情况 P4 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 荧光法(-) STR - 同工酶 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF 100mg 腺苷钴胺 HPLC法含量测定 140658-200501 10mg 前列地尔 HPLC法含量测定 140659-200702 10mg 氟尿苷 鉴别 140660-200401 20mg 次黄 HPLC法含量测定 140661-200903 20mg 检查 140662-200301 5mg 科博肽 HPLC法含量测定 140664-200501 10mg 鲑降钙素 供含量 140665-200902 50mg 辅酶 A HPLC法含量测定 140666-200501 20mg 醋酸丙氨瑞林 HPLC法含量测定 140667-200601 10mg D-核糖 含量测定 140668-200301 50mg 肌苷 HPLC法含量测定 140669-200903 4mg 细胞色素 C 鉴别、HPLC法检查 140670-200501 100mg 乙酰半胱氨酸 含量测定 140671-200501 100mg N-乙酰-L-酪氨酸 含量测定 140672-200501 100mg 盐酸赖氨酸 供鉴别及含量测定用 140673-201006 10mg 三磷酸腺苷二钠 鉴别 140674-200401 50mg 胞磷胆碱钠 HPLC法含量测定 140675-200803 50mg 苯丙氨酸 含量测定 140676-200405 50mg L-脯氨酸 含量测定 140677-200405 100mg L-丙氨酸 含量测定 140680-201002 100mg L-缬氨酸 含量测定 140681-200401 100mg L-苏氨酸 含量测定 140682-200401 100mg L-异亮氨酸 含量测定 140683-200401 100mg 甲硫氨酸 含量测定 140684-200401 100mg 精氨酸 含量测定 140685-201003 100mg L-色氨酸 含量测定 140686-200401 100mg L-亮氨酸 含量测定 140687-20040 nscription Factor3) 活化转录因子4抗体 Anti-ATF4(activating transcription factor 4) 活化转录因子6抗体 Anti-ATF6(activating transcription factor 6) 活性依赖的神经保护肽抗体 Anti-ADNP/NAP (Activity-dependent Neuroprotective protein ) 肌动蛋白α抗体 Anti-Actin α /α-SMA (Actin alpha , smooth muscle aorta) 激活素受体2A/激活素受体相互作用蛋白2a抗体 Anti-ARIP2a(Activin receptor 2A) 激活素受体2B/激活素受体相互作用蛋白2b抗体 Anti-ARIP2B(Activin receptor 2B) 极光激酶B抗体 Anti-Aurora B 间变型淋巴瘤激酶抗体 Anti-ALK/CD246Ag (Anaplastic Lymphoma Kinase) 碱性成纤维细胞生长因子抗体 Anti-BFGF/FGF-2 拮抗凋亡转录因子抗体 Anti-AATF(Apoptosis-antagonizing transcription factor) 精氨酸加压素受体2抗体 Anti-AVPR2(arginine vasopressin receptor 2) 巨噬细胞来源的趋化因子抗体 Anti-CCL22/MDC(CC chemokine ABCD-1) 巨噬细胞炎性蛋白3α抗体 Anti-CCL20/MIP3αMacrophage inflammatory ptotein 3 alpha) 聚集蛋白抗体 Anti-Agrin 抗ABC膜转运蛋白抗体 Anti-ABCG4(ATP binding cassette, subfamily G member 4) 抗B淋巴细胞粘附分子CD22抗体 Anti-CD22/fpc1/blcam(B lymphocyte cell adhesion molecule) 抗CD38抗体(小鼠、大鼠) Anti-CD38(mouse, rat) 抗Jagged1/CD339抗体 Anti-CD339/Jagged1 抗布鲁氏菌抗体 Anti-Brucella 抗丁酰胆碱脂酶单克隆抗体 Anti-BCHE(mouse Anti-butyrylcholinesterase Monoclonal) 抗碱性磷酸酶抗体 Anti-AP/ALP(Alkaline phosphatase) 抗利尿激素/血管升压素抗体 Anti-ADH/AVP(Antidiuretic Hormone;Arginine Vasopressin) 抗磷酸化Bcl-xL(pSer62)蛋白抗体 Anti-phospho-Bcl-xL(pSer62) 病毒转化的人B淋巴细胞;KM9801 抗磷酸化原癌基因c-kit抗体 Anti-phospho-c-kit/SCFR/CD117(pTyr936) 抗牛酪蛋白抗体 Anti-Casein(bovine) 克拉拉细胞蛋白(Clara细胞分泌蛋白)抗体 Anti-CC16(Clara cell protein 16) 淋巴细胞趋化因子CCL21抗体 Anti-CCL21/6Ck 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |