细胞名称 病毒转化的人B淋巴细胞;KM9401 形态特性 淋巴母细胞样 生长特性 悬浮生长 特征特性 该细胞来源于一女性重症肌无力患者的外周血。1994年由中国科学院昆明细胞库通过EB病毒转化的方法建立。 培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS 传代方法 1:2传代;5-6天一次 传代情况 P8 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 荧光法(-) STR - 同工酶 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF 25mg 赖脯胰岛素 HPLC法含量测定 140729-200501 20mg/4℃ 醋酸奥曲肽 HPLC法含量测定 140730-20060 1.6PNA单位/支 尤瑞克林 鉴别用 140731-200501 5mg 门冬酰胺酶(大肠杆菌) 供门冬酰胺酶鉴别用 140732-200501 5mg 门冬酰胺酶(欧文菌) 供门冬酰胺酶鉴别用 140733-200501 1mg 鲑降钙素 鉴别,有关物质检查 140734-200501 10mg 5'-胞苷酸 检查 140735-200501 10mg 4'-羟基苯鉴别及含量测定 140736-200501 10mg 5'-羟基吲哚乙酸 HPLC法含量测定 140737-200501 40mg 马尿酸 HPLC法含量测定 140738-200501 40mg 苯乙酰谷氨酰胺 HPLC法含量测定 140739-200501 10mg 氧化型谷胱甘肽 检查 140746-200801 50mg 门冬酰胺 鉴别 140747-201001 50mg 门冬氨酸鸟氨酸 HPLC法含量测定 140749-200701 20mg 普罗瑞林 HPLC法含量测定 140750-200701 6U 尖吻蝮蛇血凝酶 鉴别 140751-200701 0.3ml 角鲨烷 内标物 140752-200601 10mg 戈那瑞林 HPLC法含量测定 140754-200701 25mg 门冬氨酸镁 鉴别 140756-200801 25mg 门冬氨酸钾 鉴别 140757-200801 329单位 胰激肽原酶 检查 140770-200701 50mg L -肌肽 供聚普瑞锌 140771-201001 20mg 聚普瑞锌 供聚普瑞锌 140772-201001 50mg 醋酸精氨酸 供氨基酸鉴别 140781-200801 50mg 盐酸阿糖胞苷 供盐酸阿糖胞苷 140784-201001 20mg β-丙氨酸 检查用 140783-200801 1000u 乌司他丁 供2010版 140785-201001 100mg 肝素钠 供鉴别与有关物质系统适用性 140787-201001 见标示量 前列腺素A1 供前列地尔 140790-200 dulin) 凝血酶Ⅲ抗体 Anti-ATH Ⅲ(Antithrombin Ⅲ) 桥连整合因子蛋白抗体 Anti-BIN1(Bridging integrator protein-1) 禽脑脊髓炎病毒抗体 Anti-AEV(Avian Encephalomyelitis virus) 氢钾ATP酶通道蛋白抗体 Anti-ATP4B/H+K+ ATPase(potassium-transporting ATPase subunit beta) 醛缩酶A抗体 Anti-ALDA (Aldolase A) 醛糖还原酶抗体 Anti-AKR1B1/ADR(aldose reductase) 染色盒同源物3抗体 Anti-CBX3(Chromobox homolog 3) 人癌胚抗原抗体 Anti-CEA (Carcinoembryonic Antigen ) 乳癌相关抗原抗体 Anti-CA15-3 乳癌易感基因1抗体(人) Anti-BRCA1(Breast cancer susceptbility gene 1)(human) 乳癌易感基因1抗体(小鼠 大鼠) Anti-BRCA1(Breast cancer susceptbility gene 1)(mouse rat) 乳癌易感基因2抗体 Anti-BRCA2(Breast cancer susceptbility gene 2) 乳癌转移抑制基因1抗体 Anti-BRMS-1 (Breast cancer metastasis-suppressor 1) 软骨蛋白聚糖/可聚蛋白多糖抗体 Anti-Aggrecan 软骨糖蛋白39抗体 Anti-CGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 ) 三磷酸腺苷结合盒亚家族G1抗体 Anti-ABCG1(ATP-binding cassette sub-family G member 1) 三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体 Anti-ABCG2/BCRP/BXP-21(breast cancer resistance protein) 上皮型钙粘附分子/血管内皮钙粘蛋白抗体 Anti-CD144/VE-cadherin/VECD(Vascularendothelial cell cadherin/VE-cadherin)VE-cadherin 蛇毒巴曲酶抗体 Anti-Batroxobin 神经母细胞特异性转移因子抗体 Anti-ASCL1/MASH1(Achaete-scute homolog 1) 神经丝蛋白抗体 Anti-AD7C-NTP/NTP/AF(Neurual thread protein) 神经丝蛋白抗体(人) Anti-AD7C-NTP/NTP/AF (Neurual thread protein)human 神经细胞粘附分子1抗体 Anti-CD56/NCAM1(Neural Cell Adhesion Molecule 1) 神经细胞粘附分子1抗体(Elisa IP IHC 用) Anti-CD56/NCAM1(Neural Cell Adhesion Molecule 1) 病毒转化的人B淋巴细胞;KM9401 神经细胞粘附分子配体1抗体 Anti-CD171/NCAM-L1(Neural cell adhesion molecule ligand 1) 神经元突触前膜蛋白抗体 Anti-Amph(Amphiphysin) 肾上腺皮质发育异常蛋白抗体 Anti-ACD/PTOP(Adrenocortical dysplasia protein) 肾上腺素能受体β1抗体 Anti-ADRB1 (β1-adrenergi 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |