细胞名称 病毒转化的人B淋巴细胞;KM9405 形态特性 淋巴母细胞样 生长特性 悬浮生长 特征特性 该细胞来源于一傣族男性的外周血。1994年由中国科学院昆明细胞库通过EB病毒转化的方法建立。 培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS 传代方法 1:2传代;5-6天一次 传代情况 P4 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 荧光法(-) STR - 同工酶 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF 质 171267-201001 50mg/支 2-氨基-5-氯二苯酮(氯氮卓杂质Ⅰ) 有关物质 171268-201001 20mg N-脱烷基西泮(咪达唑仑杂质) 有关物质 171270-201001 10-姜酚 10-Gingerol ≥95% 10-羟基喜树碱 10-Hydroxy camptothecin "≥95% " 10-脱乙酰巴卡丁III 10-Deacetylbaccatine III "≥99% " 10-硝基喜树碱 10-Nitro Camptothecin "≥97% " 11-氧-罗汉果皂甙V 11-oxo-mogroside V ≥98% 13-乙酰基-9-羟基巴卡丁III 13-Acetyl-9-dihydrobaccatin III "≥98% " 18B-甘草次酸 18-beta-Glycyrrhetinic acid 97% 1-二十八烷醇 1-Octacosanol "≥95% " 1-脱氧野尻霉素 1-Deoxynojirimycin "≥95% " "1-乙酸基-5-去乙酰基-巴卡亭 I " 1-acetoxy-5-deacetyl-baccatin I ≥98% 2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷 2,3,5,4-tetrahydroxyl diphenylethylene-2-o-glucoside ≥98% 20(22)-烯-原人参二醇 20(22)-ene-PPD ≥97% 20(S)-人参皂苷C-K 20(S)-Ginsenoside C-K "≥98% " 20(S)-原人参二醇皂苷 20(S)-Protopanaxadiol saponins "≥98% " "23-羟基白桦酸 " Anemosapogenin "≥98% " "25-羟基-原人参二醇 " 25-OH-Protopanaxdiol ≥97% "25-羟基-原人参三醇 " 25-OH-Protopanaxtiol ≥97% "2-O-没食子酰基金丝桃苷 " 2-O-galloylhyperin "≥98% " 2-羟基泽兰内酯 2-Hydroxyeupatolide "≥97% " 3’-甲氧基-5’-羟基异黄酮-7- O-β-D-葡萄糖苷 3’-methoxy-5’-hydroxyisoflavone-7-O-β-D-glucoside 95% "4-羟基-L-异亮氨酸 " 4-Hydroxyisoleucine ≥98% ≥97% 4'-去甲基表鬼臼毒素 4'-Demethylepipodophyllotoxin "≥95% " 5-羟基色氨酸 5-HTP "≥98% " 6-姜酚 6-Gingerol "≥98% " 6-姜烯酚 "6-Shogaol 7-木糖基-紫杉醇 "7-xylosyltaxol ific isoform precursor) 血管生成素-1抗体 Anti-ANG-1/(Angiopoietin 1; angiopoietin-like 4) 血管生成素-2抗体 Anti-ANG-2 (Angiopoietin 2)hu, mo, rat, pig, dog, chi 血管位蛋白样2/血管生成素样蛋白-2抗体 Anti-ANGPTL2/ANG-2 (Angiopoietin-like Protein 2) 血管位蛋白样4/血管生成素样蛋白-4抗体 Anti-ANGPTL4/ANG-4 (Angiopoietin-like Protein 4) 血管组织血管紧张素Ⅱ1型受体抗体 Anti-Agtr1/AT1a(Angiotensin II receptor, type 1a) 血小板内皮细胞黏附分子-1抗体 Anti-CD31(PECAM-1) 氧化还原因子1抗体 Anti-APEX1/Ref-1(redoxfactor-1) 一种抑癌基因抗体 Anti-BECN1(Beclin 1) 阴离子交换蛋白3抗体 Anti-AE3/SLC4A3(anion exchanger protein 3) 载脂蛋白D抗体 Anti-APOD/Apolipoprotein D 载脂蛋白E抗体 Anti-Apo-E (Apolipoprotein E) 载脂蛋白H抗体 Anti-ApoH(Apolipoprotein H) 造血干细胞抗原CD133抗体 Anti-CD133 antigen 粘附分子相关蛋白a1抗体 Anti-CTNNAL1(catenin(cadherin-associated protein)alpha-like1) 粘膜相关上皮趋化因子MEC抗体 Anti-CCL28(CC Chemokine Ligand 28) 整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型(抗体) Anti-ADAM-TS1/METH1(a disintegrin and metalloproteinase with-thrombospodin type 1) 整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-12抗体 Anti-ADAM-TS12(A Disintegrin-like and Metalloprotease with Thrombospondin Type 1 Motif, 12) 整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7(抗体) Anti-ADAM-TS7 (A Disintegrin-like and Metalloprotease with Thrombospondin Type 1 Motif, 7) 整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7抗体 (N端抗体) Anti-ADAM-TS7 (A Disintegrin-like and Metalloprotease with Thrombospondin Type 1 Motif, 7) 脂肪细胞增强结合蛋白1 Anti-AEBP1 (Adipocyte enhance binding protein 1) 脂肪炎症因子Apelin抗体 Anti-Apelin 病毒转化的人B淋巴细胞;KM9405 脂肪组织分化相关蛋白抗体 Anti-ADFP/ADRP/adipophilin (adipose differentiation-related protein) 脂联素抗体 Anti-Adiponectin 脂联素受体-1抗体 Anti-Adipo R1 (adiponectin receptor 1) 脂联素受体-2抗体 Anti-Adipo R2 (adiponectin re 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |