细胞名称 病毒转化的人B淋巴细胞;KMY0923 形态特性 淋巴母细胞样 生长特性 悬浮生长 特征特性 该细胞系来源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明细胞库通过EB病毒转化的方法建立。 培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS 传代方法 1:2传代;5-6天一次 传代情况 P2 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 荧光法(-) STR - 同工酶 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF 97% 20(S)-人参皂苷Rg3 Ginsenoside-Rg3 ≥97% 20(S)-人参皂苷-RH2 20(S)-Ginsenoside-RH2 ≥98% 20mg/支 大豆苷 Daidzin 大豆甙 552-66-9 20mg/支 大豆苷元 Daidzein 大豆甙元;黄豆苷元 486-66-8 20mg/支 染料木素 Genistein 染料木黄酮;金雀异黄酮 446-72-0 20mg/支 染料木苷 Genistin 5,7-三羟异黄酮-7-糖苷 529-59-9 20mg/支 欧前胡素 Imperatorin 482-44-0 20mg/支 异欧前胡素 Isoimperatorin 482-45-1 20mg/支 远志酸 Polygalacic acid 22338-71-2 20mg/支 远志皂苷元 Senegenin 2469-34-3 10mg/支 莱苞迪甙A Rebaudioside A 莱苞迪苷A 58543-16-1 20mg/支 黄芩苷 Baicalin 黄芩甙 21967-41-9 20mg/支 野黄芩苷 Scutellarin 野黄芩甙;灯盏花乙素;灯盏花素 27740-01-8 20mg/支 黄芩素 Baicalein 黄芩苷元; 黄芩黄素 491-67-8 20mg/支 秦皮素 Fraxetin 秦皮亭;白蜡树内酯 574-84-5 20mg/支 秦皮甲素 Esculin 531-75-9 20mg/支 秦皮乙素 6,7-Dihydroxycoumarin 305-01-1 20mg/支 绿原酸 Chlorogenic acid 327-97-9 20mg/支 1-咖啡酰奎宁酸 20mg/支 1,5-二咖啡酰奎宁酸 1,5-Dicaffeoylquinic acid 30964-13-7 20mg/支 盐酸巴马汀 Palmatine hydrochloride 黄藤素;棕榈碱 10605-02-4 20mg/支 橙皮苷 Hesperidin 橙皮甙 520-26-3 20mg/支 新橙皮苷 Neohesperidin 新橙皮甙 13241-33-3 20mg/支 柴胡皂苷B Saikosaponin B 柴胡皂甙B 此产品为柴胡皂苷B1和B2的混合体 20mg/支 橙皮素 Hesperitin 520-33-2 20mg/支 甘草酸 Glycyrrhizic acid V型底,480ul,透明 2.0ml,旋盖,可立 2.0ml,无色 600ul,圆孔,V型底 2.0ml,彩色 吸嘴250ul无色带刻度,盒装,无菌 50ul盒装,无菌 100片装木质载玻片存储盒 0.2ml,平盖 0.2ml,平盖,彩色 圆孔无盖塑料包埋盒 长条孔无盖塑料包埋盒 吸嘴200ul低吸附型,无色尖嘴,盒装,无菌 离心管5ml 病毒转化的人B淋巴细胞;KMY092320片装塑料晾片板(有分隔) 定做 10*10 24*50 吸嘴1000ul广嘴, 袋装 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |