细胞名称 稳定表达的人肺癌细胞；A549-Cas9-538 形态特性 上皮样；多角形 生长特性 贴壁生长 特征特性 该细胞是采用慢病毒感染的方式使A549细胞稳定表达Cas9-Flag-Neo，经400ug/mlG418筛选得到的单克隆，经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白，可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。 培养条件 McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 10%FBS；400ug/ml G418 传代方法 1:3~1：8传代；每周2~3次。 传代情况 C3 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 培养法（-） STR Amelogenin：X,Y；CSF1PO：10,12；D12S391：18,19；D13S317：11,11；D16S539：11,12；D18S51：14,17；D19S433：29,29；D21S11：29,29；D2S1338：24,24；D3S1358：16,16；D5S818：11,11；D6S1043：11,13；D7S820：8,11；D8S1179：13,14；FGA：23,23；Penta E：7,11；TH01：8,9.3；TPOX：8,11；vWA：14,14； 同工酶 染色体 产品图片：
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用： 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名称： CD36
肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养（GB标准） 英文名称： KLK11
葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名称： CD97
哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用： 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验，还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称： NTRK3
血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用： 加入脱纤维羊血或兔血，制成血琼脂培养基，用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10－... 英文名称： HA
胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用： 可广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称： HA
Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用： 试剂A和试剂B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名称： SPARCL1
PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM琼脂。 英文名称： IL1RL1
李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名称： IL13RA1
李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名称： PECAM1
EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名称： TNF 射干苷 611-40-5 20mg/支 五味子甲素 Schizandrin A 61281-38-7 20mg/支 五味子乙素 Schizandrin B 61281-37-6 20mg/支 五味子醇甲 Schisandrol A 7432-28-2 20mg/支 五味子酯乙 Schisantherin B 58546-55-7 20mg/支 五味子酯甲 Schisantherin A 58546-56-8 20mg/支 五味子醇乙 Schisandrol B "分子式：C23H28O7 分子量：416.47" 20mg/支 西红花苷 Crocin 藏红花素；番红花苷 42553-65-1 20mg/支 西红花苷I Crocin I 94238-00-3 20mg/支 西红花苷II Crocin II 55750-84-0 20mg/支 桑色素 Morin hydrate 桑黄素 480-16-0；654055-01-3 20mg/支 D-(-)-奎宁酸 D-(−)-Quinic acid 右旋奎宁酸;D-(-)-奎尼酸;奎宁酸;奎尼酸 77-95-2 20mg/支 梓醇 Catalpol 2415-24-9 20mg/支 根皮苷 Phlorizin 60-81-1 20mg/支 蜕皮激素 Ecdysterone β-蜕皮激素；β-蜕皮甾酮 5289-74-7 20mg/支 6-姜酚 6-gingerol 姜辣素;姜酮醇 23513-14-6 20mg/支 蒿本内酯 Ligustilide 藁本内酯 4431-01-0; 81944-09-4 5mg/支 脱氧野尻霉素 1-Deoxynojirimycin 1-脱氧野尻霉素 19130-96-2 20mg/支 土木香内酯 Alantolactone 546-43-0 20mg/支 柠檬苦素 Limonin 吴茱萸内酯 1180-71-8 20mg/支 诺米林 Nomilin 1063-77-0 1mg/支 河素 Tetrodotoxin 河 224-458-8 20mg/支 罗汉果皂苷V Mogroside Ⅴ 罗汉果苷V;罗汉果甜苷V；罗汉果皂甙V;罗汉果甜甙V 88901-36-4 20mg/支 安石榴甙 Punicalagin 安石榴苷 65995-63-3 20mg/支 獐牙菜苦苷 Swertiamarin 獐牙菜苦甙;獐牙菜苦素 17388-39-5 20mg/支 朝藿定A Epimedin A /NKp30/NCR3(Natural killer cell p30-related protein) 细胞毒性受体NK-p44抗体 Anti-CD336/NKp44/NCR2(Natural killer cell p44-related protein) 细胞毒性受体NK-p46抗体 Anti-CD335/NKp46/NCR1 细胞分裂周期蛋白6抗体 Anti-Cdc6（Cell Division Cycle protein 6） 细胞间粘附分子-1抗体 Anti-CD54/ICAM-1(Intercellular dhesion molecule 1) 细胞间粘附分子-2抗体 Anti-CD102/ICAM-2（intercellular adhesion molecules-2） 细胞间粘附分子-3抗体 Anti-CD50/ICAM-3（intercellular adhesion molecules-3） 细胞死亡调解子抗体 Anti-Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death) 带标签袋站式标本袋 N－35一次性刀片 2毫升离心管 美国美克颗粒状切片石蜡 浅蓝色切片石蜡 稳定表达的人肺癌细胞；A549-Cas9-538吸嘴0.5-10ul盒装,无菌 18*18 玻璃试管13*100 玻璃试管10*100 滤芯吸嘴500ul盒装,无菌 操作方法:
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。
4. 37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。
(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟）
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |
