细胞名称 人抗嵌合抗原受体T细胞株； CAR19-T-PL 形态特性 上皮样 生长特性 贴壁生长 特征特性 该细胞属保藏，其特征特性尚未公开。 培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS 传代方法 1:3传代，3-4天传1次 传代情况 C5 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 阴性 STR 同工酶 染色体 产品图片：
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用： 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名称： CD36
肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养（GB标准） 英文名称： KLK11
葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名称： CD97
哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用： 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验，还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称： NTRK3
血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用： 加入脱纤维羊血或兔血，制成血琼脂培养基，用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10－... 英文名称： HA
胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用： 可广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称： HA
Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用： 试剂A和试剂B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名称： SPARCL1
PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM琼脂。 英文名称： IL1RL1
李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名称： IL13RA1
李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名称： PECAM1
EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名称： TNF 紫菀酮 20mg/支 二氢欧山芹醇当归酸酯 Columbianadin 5058-13-9 20mg/支 白头翁皂苷B4 Anemoside B4 白头翁皂甙B4 129741-57-7 石吊兰甲素 20mg/支 次野鸢尾黄素 Irisflorentin 41743-73-1 20mg/支 胡麻属苷 Sesamoside 117479-87-5 20mg/支 路路通酸 20mg/支 表木栓醇 20mg/支 鸭脚树叶碱 20mg/支 山柰酚-3-O-芸香糖苷 20mg/支 4'-去甲氧基表鬼臼毒素 4'-Demethylepipodophyllotoxin 6559-91-7 20mg/支 葫芦素B 20mg/支 汉黄芩素 Wogonin 632-85-9 20mg/支 松萝酸 Usnic acid 松罗酸 125-46-2 20mg/支 7-羟基香豆素 Umbelliferone 伞形花内酯; 伞形酮 93-35-6 20mg/支 8-姜酚 8-Gingerol 23513-08-8; 30462-35-2 20mg/支 10-姜酚 10-Gingerol 23513-15-7 20mg/支 石斛碱 Dendrobine 2115-91-5 20mg/支 雷公藤内酯酮 Triptonide 雷藤酮; 雷公藤羰内酯 38647-11-9 20mg/支 异阿魏酸 3-Hydroxy-4-methoxycinnamic acid 537-73-5 20mg/支 刺芒柄花苷 Ononin 芒柄花苷 486-62-4 20mg/支 没食子儿茶素 GC; (-)-gallocatechin 棓儿茶酸; 没食子酰儿茶素 3371-27-5 20mg/支 牡荆素葡萄糖苷 Glucosyl-vitexin 76135-82-5 20mg/支 毛蕊异黄酮 Calycosin 20575-57-9 20mg/支 毛蕊异黄酮苷 Calycosin-7-O- 用于弧菌的显色培养，副溶血性弧菌显蓝色，其它弧菌显无色。 Vibrio Chromogenic Medium 弧菌显色培养基 1000ml 用于坂崎杆菌的显色培养，坂崎杆菌显蓝色，其它肠杆菌显无色。 Enterobacter sakazakii Chromogenic Medium 坂崎杆菌显色培养基 1000ml 用于分离和鉴别常见尿道致病菌 Urine Orientation Chromogenic Medium 尿道定位显色培养基 1000ml 用于大肠杆菌0157的分离培养(SN标准) Sorbitol Maconkey Agar Base 山梨醇麦康凯琼脂基础(SMAC) 250 添加于100ml HB0121中 噻孢霉素 A 1.25μg/支*5 适量添加于HB0121 1%亚碲酸钾溶液 5ml*10 0.01g添加于100ml LST-MUG中用于0157鉴定 （MUG） 4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷 0.1 用于0157选择性增菌(USDA-FSIS方法) mE.Coli Broth mEC 肉汤 250 用于0157选择性增菌(ISO方法) mTSB Broth With Novobiocin mTSB肉汤 250 添加于100ml mEC肉汤和mTSB肉汤中用于0157选择性增菌 Novobiocin 新生霉素A 2mg/支*5 用于滤膜法大肠杆菌0157的分离培养(NEOGEN方法) SD-39 Agar SD-39琼脂 250 标准平板计数琼脂,含糖,用于细菌总数的测定(SN标准) Plate Count Agar 平板计数琼脂（PCA） 250 用于大肠菌群、大肠杆菌的测定(SN标准) Brilliant Green Lactose Bile Broth 煌绿乳糖胆盐肉汤 （BGLB） 250 用于粪大肠菌群、大肠杆菌的测定(SN标准) E.Coli Broth EC 肉汤 250 弱选择性培养基、用于分离肠道致病菌，特别是大肠杆菌(SN标准) Eosin-Methylene Blue Agar 伊红美蓝琼脂 (EMB) 250 一般细菌培养、转种、复壮、增菌等(GB标准) Nutrient Broth 营养肉汤 (NB) 250 细菌计数、不含糖，可作血琼脂基础和传代用(GB标准) Nutrient Agar 营养琼脂 (NA) 250 用于大肠菌群，粪大肠菌群，大肠杆菌的测定(GB标准) Lactose Bile Broth 乳糖胆盐发酵培养基 250 用于大肠菌群,粪大肠菌群,大肠杆菌的测定(GB标准) Lactose Broth 乳糖复发酵培养基 250 人抗嵌合抗原受体T细胞株； CAR19-T-PL用于大肠杆菌固体平板测定,肠道菌选择性分离 Desoxycholate Lactose Agar 去氧胆酸盐琼脂 250 用于大肠杆菌的甲基红和VP试验(SN标准) Methyl Red Voges Proskauer Broth MR-VP培养基 250 用于大肠菌群的固体平板检测(SN标准) Violet R 操作方法:
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。
4. 37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。
(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟）
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |
