细胞名称 小鼠胚胎细胞；RMD6 形态特性 上皮样 生长特性 贴壁生长 特征特性 该细胞属保藏，其特征特性尚未公开。 培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS 传代方法 1:3传代，3-4天传1次 传代情况 C5 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 阴性 STR 同工酶 染色体 产品图片：
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用： 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名称： CD36
肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养（GB标准） 英文名称： KLK11
葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名称： CD97
哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用： 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验，还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称： NTRK3
血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用： 加入脱纤维羊血或兔血，制成血琼脂培养基，用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10－... 英文名称： HA
胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用： 可广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称： HA
Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用： 试剂A和试剂B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名称： SPARCL1
PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM琼脂。 英文名称： IL1RL1
李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名称： IL13RA1
李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名称： PECAM1
EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名称： TNF 503 100mg 格隆溴铵 含量测定 常温，避光 100022-200403 100mg 甘罗溴铵 含量测定 常温，避光 50mg 谷氨酸 鉴别 常温，避光 100023-198601 100mg 磺胺甲噁唑 含量测定 常温，避光 100025-200904 100mg 磺胺嘧啶 含量测定 常温，避光 100026-200903 100mg 炔诺孕酮 含量测定 常温，避光 100028-199907 100mg 甲巯咪唑 含量测定 常温，避光 100030-200504 100mg 甲氧苄啶 含量测定 常温，避光 100031-200304 50mg 己酸羟孕酮 常温，避光 100032- 100mg 己烯雌酚 含量测定 常温，避光 100033-200607 100mg 枸橼酸氯米芬 含量测定 常温，避光 010034－200503 50mg 甲磺酸双氢麦角毒碱 常温，避光 50mg 克霉唑 含量测定 常温，避光 100037-200306 100mg 邻甲苯磺酰胺 检查用 常温，避光 100038-200803 100mg 6-巯基嘌呤 检查用 常温，避光 100039-200602 50mg 2-氯-4-硝基苯胺 检查用 常温，避光 100042-200002 50mg 氯普噻吨 检查用 常温，避光 100043-199701 50mg 马来酸麦角新碱 常温，避光 50mg 咪唑 检查用 常温，避光 100045-199903 100mg 吡喹酮 含量测定 常温，避光 100046-200504 100mg 马来酸氯苯那敏 含量测定 常温，避光 100047- 200606 100mg 炔雌醚 含量测定 常温，避光 100 用于婴儿食品和乳粉中叶酸测定 Folic Acid Assay Medium 叶酸测定培养基 250 用于婴儿食品和乳粉中泛酸测定 Pantothenic Acid Assay Medium 泛酸测定培养基 250 用于婴儿食品和乳粉中游离生物素测定 Free Biotin Assay Medium 游离生物素测定培养基 250 用于气单胞菌分离培养 Aeromonas Medium Base(Ryan) 气单胞菌培养基基础 250 ACETATE 醋酸盐鉴别琼脂 250 每支添加剂加入100ml气单胞菌培养基基础 Ampicillin Selective Supplement 气单胞菌培养基添加剂 10支 用于培养支原体的基础培养基 Mycoplasma Broth Base 支原体培养基基础 250 一种通用培养基，用于各种微生物的培养(AOAC EP IDF NMKL USDA USP) Tryptose Soya Agar 胰蛋白胨大豆琼脂 250 用于布氏菌的选择性分离培养 Brucella Selective Medium 布氏菌选择性培养基 250 Rv 改良rv培养基 250 用于脆弱拟杆菌群的分离培养 BBE Agar 类杆菌-胆汁-七叶甙（BBE）琼脂 250 用于军团菌的选择性分离培养(OXOID方法) BCYE Agar(Legionella Agar) BCYE 琼脂(Legionella 琼脂) 250 发酵蛋白胨 250 用于念球菌的分离培养和计数(OXOID方法) BIGGY Agar(Nickerson Medium) BIGGY 琼脂 250 用于尿液中微生物的选择性分离培养(OXOID方法) C.L.E.D Medium C.L.E.D 培养基 250 每支加入100ml C.L.E.D 培养基中 C.L.E.D Medium Supplement C.L.E.D 培养基添加剂 1ml*5支 小鼠胚胎细胞；RMD6用于淋球菌的分离培养(OXOID方法) GC Agar GC琼脂 250 用于双歧杆菌的分离培养 BLB Medium BLB培养基 250 用于从含革兰氏阴性菌的标本中分离培养革兰氏阳性菌 PEA Agar PEA 琼脂 250g 用于过程中无菌监测(Acumedia方 操作方法:
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。
4. 37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。
(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟）
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |
