细胞名称 中国仓鼠卵巢细胞;CHO-HCV-E1 形态特性 上皮细胞样 生长特性 贴壁生长 特征特性 CHO-HCV-E1细胞整合有丙型肝炎病毒的E1基因,能稳定表达E1蛋白,是HCV基础研究的*摸型。它由武汉大学病毒学国家重点实验室郭佳博士于2008年构建并保存。 培养条件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS 传代方法 1:3传代,2-3天传一代 传代情况 C19 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 阴性 STR 同工酶 同工酶鉴定 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF oloid Mesylates 300mg 129-51-1 马来酸麦角新碱标准品 100mg 57-87-4 麦角固醇标准品 Ergosterol 50mg 379-79-3 酒石酸麦标准品 150mg 639-81-6 麦角异胺标准品 Ergotaminine (List Chemical) 100mg 89-65-6 异抗坏血酸标准品 Erythorbic Acid 50mg 149-32-6 赤藓糖醇标准品 Erythritol 200mg 114-07-8 红霉素标准品 Erythromycin 250mg 527-75-3 红霉素B标准品 Erythromycin B 100mg 1675-02-1 红霉素C标准品 Erythromycin C 50mg 992-62-1 红霉素相关物质N标准品 50mg 3521-62-8 *红霉素标准品 Erythromycin Estolate 200mg 1264-62-6 琥乙红霉素标准品 Erythromycin Ethylsuccinate 200mg 23067-13-2 葡庚糖酸红霉素标准品 Erythromycin Gluceptate 200mg 3847-29-8 乳糖酸红霉素标准品 Erythromycin Lactobionate 200mg 643-22-1 硬脂酸红霉素标准品 Erythromycin Stearate 200mg 49746-10-3 四品荧光素钠标准品 Erythrosine Sodium 100mg 11072-93-8 β-七叶素标准品 Escin 350mg 219861-08-2 草酸艾司西酞普兰对照品标准品 Escitalopram Oxalate 200mg 128173-53-5 草酸艾司西酞普兰杂质A对照品标准品 10mg 217087-09-7 埃索美拉唑镁标准品 Esomeprazole Magnesium 10mg 50-28-2 雌二醇标准品 Estradiol 500mg 8抗体IgG Anti-FLASH/CASP8AP2/FITC 荧光素标记半胱氨酸蛋白酶8相关蛋白2抗体IgG Anti-Caspase-9/FITC 荧光素标记白介素1-β转化酶样凋亡蛋白酶6抗体IgG Anti-Caspase-9/FITC 荧光素标记白介素1-β转化酶样凋亡蛋白酶6抗体IgG Anti-Phospho-Caspase-9 (Pry153) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化白介素1-β转化酶样凋亡蛋白酶6抗体IgG Anti-Caspase-10/FITC 荧光素标记半胱胺酸蛋白酶-10抗体IgG Anti-Caspase-12(hunman)/FITC 荧光素标记半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗体(人)IgG Anti-Caspase-12/FITC 荧光素标记半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗体IgG Anti-Caspase-13/FITC 荧光素标记半胱胺酸蛋白酶蛋白-13抗体IgG Anti-Phospho-Caspase-9 (Thr125) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化白介素1-β转化酶样凋亡蛋白酶6抗体IgG Anti- Alpha-Catenin/ Alpha-cats /FITC 荧光素标记α-连环蛋白抗体(α-α链接素)IgG Anti- Beta-catenin/ Beta-cats /FITC 荧光素标记 β-连环蛋白抗体IgG Anti-Phospho- Beta-Catenin (Ser33/37) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化β 连环素蛋白抗体IgG anti-p- Beta catenin/FITC 荧光素标记磷酸化β-连环蛋白抗体IgG Anti-Phospho- Beta-Catenin (Ser45)/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化β 连环素蛋白抗体IgG Anti-Phospho- Beta-Catenin (Ser552) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化β 连环素蛋白抗体IgG Anti-Phospho- Beta-Catenin (Ser675) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化β 连环素蛋白抗体IgG 中国仓鼠卵巢细胞;CHO-HCV-E1Anti-Phospho- Beta-Catenin (Thr41/Ser45) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化β 连环素蛋白抗体IgG Anti- Gamma-Catenin/ Gamma-cats /FITC 荧光素标记γ-连环蛋白抗体(γ-γ链接素)IgG anti-cath-B/CB/FITC 荧光素标记组织蛋白酶B 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |