细胞名称 叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-21 形态特性 成纤维细胞样 生长特性 贴壁生长 特征特性 该细胞系是于1961年由Macpherson IA、Stoker MGP建系,源自5只未辨性别的1天龄仓鼠肾;可作为转化宿主;OIE组织将该细胞用于狂犬病的诊断。 培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS 传代方法 1:2~1:10传代;每周换液1~2次。 传代情况 P75 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 培养法(-) STR - 同工酶 染色体 43~50 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF Dextran 70 Calibration 100mg 9004-54-0 葡聚糖250校准用标准品 Dextran 250 Calibration 100mg 698-87-3 右旋安非他命相关物质A标准品 25mg 103-79-7 右旋安非他命相关物质B标准品 25mg 125-71-3 右美沙芬标准品 Dextromethorphan 2g 6700-34-1 氢右美沙芬标准品 500mg 50-99-7 葡萄糖标准品 Dextrose 500mg 68990-54-5 二乙酰甘油一酸酯标准品 Diacetylated Monoglycerides 200mg 596-09-8 二乙酸荧光素标准品 Diacetylfluorescein 200mg 50978-11-5 泛影酸标准品 Diatrizoic Acid 100mg 1713-07-1 泛影酸相关物质A标准品 50mg 364-98-7 氯甲苯噻嗪标准品 Diazoxide 200mg 1961-12-1 盐酸地布卡因标准品 Dibucaine Hydrochloride 500mg 84-74-2 邻苯二甲酸二丁酯标准品 Dibutyl Phthalate 200mg 109-43-3 癸二酸二丁酯标准品 Dibutyl Sebacate (AS) 1ml 480-30-8 氯醛比林标准品 Dichloralphenazone CIV 200mg 120-83-2 2,4-二氯酚标准品 2,4-Dichlorophenol 100mg 120-97-8 双氯非那胺标准品 Dichlorphenamide 200mg 62-73-7 敌标准品 Dichlorvos (AS) 150mg 101831-37-2 地克珠利标准品 Diclazuril 200mg 地克珠利系统适用性合剂标准品 50mg 15307-81-0 双氯芬酸钾标准品 Diclofenac Potassium 200mg 15307-79-6 双氯芬酸钠标准品 Diclofenac Sodium 200mg 15362-40-0 双氯芬酸相关物质A标准品 25mg 13412-64-1 双氯西林钠标准品 Dicloxacillin Sodium 500mg 66-76-2 双羟香豆素标准品 Dicumarol 200mg 92-51-3 二环己基标准品 Dicyclohexyl 2ml×2amplues Anti-ATPase Na+/K+protein/FITC 荧光素标记钠钾ATP酶通道蛋白抗体IgG Anti-Na,K-ATPase alpha-1 (Phospho Ser23) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化钠钾ATP酶蛋白a1抗体IgG Anti-Phospho-Na,K-ATPase alpha-1 (Tyr10) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化钠钾ATP酶蛋白a1抗体IgG Anti-Na,K-ATPase alpha-1 (Phospho Ser16) /FITC 荧光素标记兔抗小鼠、牛、猪磷酸化钠钾ATP酶蛋白a1抗体IgG Anti-ATP-sensitive K+ channel subunit Kir6.2/FITC 荧光素标记ATP敏感性钾通道亚基kir6.2抗体IgG Anti-ATRN/FITC 荧光素标记吸引素抗体IgG Anti-ATX/Autotaxin/E-NPP2/FITC 荧光素标记自分泌运动因子抗体IgG Anti-ATXN1/Ataxin 1/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠失调症蛋白1抗体IgG Anti-Ataxin-1(phospho Ser776)/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化失调症蛋白1抗体IgG Anti-AU5 tag/FITC 荧光素标记AU5 tag标签抗体IgG Anti-AU1 tag/FITC 荧光素标记抗AU1 tag标签抗体IgG Anti-Aurora A /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠、牛、兔、马、猪有丝分裂激酶A抗体IgG Anti-Phospho-Aurora A (p-Thr288) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化有丝分裂激酶A抗体IgG Anti-Aurora B/FITC 荧光素标记极光激酶B抗体IgG 叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-21Anti-Phospho-Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化有丝分裂激酶B/C抗体IgG Anti-Aurora A/Aurora B/Aurora C /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠有丝分裂激酶A、B、C抗体IgG Anti-Aurora C /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠、牛、兔、猪有丝分裂激酶B抗体IgG 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |