细胞名称 中国仓鼠卵巢细胞;CHO-HCV-p7 形态特性 上皮细胞样 生长特性 贴壁生长 特征特性 CHO-HCV-P7细胞整合有丙型肝炎病毒的P7基因,能稳定表达P7蛋白,是HCV基础研究的*摸型。它由武汉大学病毒学国家重点实验室郭佳博士于2008年构建并保存。 培养条件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS 传代方法 1:3传代,2-3天传一代 传代情况 C19 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 阴性 STR 同工酶 同工酶鉴定 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF mg 552-66-9 豆苷标准品 Daidzin 30mg 17230-88-5 达那唑标准品 Danazol 200mg 7261-97-4 丹曲林标准品 Dantrolene 200mg 24868-20-0 丹曲林钠标准品 Dantrolene Sodium 100mg 301359-05-7 丹曲林相关物质A标准品 50mg 57268-33-4 丹曲林相关物质B标准品 50mg 7147-77-5 丹曲林相关物质C标准品 50mg 80-08-0 4,4'-二氨基二苯砜标准品 Dapsone 125mg 23541-50-6 盐酸柔红霉素标准品 Daunorubicin Hydrochloride 200mg 541-22-0 溴化十烃季胺标准品 Decamethonium Bromide 250mg 18507-89-6 癸氧喹酯标准品 Decoquinate 200mg 138-14-7 去铁铵标准品 Deferoxamine Mesylate 500mg 520-45-6 脱氢乙酸标准品(酮式) Dehydroacetic Acid 200mg 盐酸脱氢卡替洛尔标准品 Dehydrocarteolol Hydrochloride 100mg 81-23-2 去氢胆酸标准品 Dehydrocholic Acid 200mg 56-94-0 地美溴铵标准品 Demecarium Bromide 250mg 64-73-3 盐酸地美环素标准品 200mg 86398-53-0 苯甲地那铵标准品 Denatonium Benzoate 200mg 264624-38-6 脱氧升麻烃标准品 23-EPI-26-Deoxyactein 20mg 154-17-6 D-2-脱氧葡萄糖标准品 2-Deoxy-D-Glucose (AS) 100mg 23515-45-9 盐酸去乙酰地尔硫卓标准品 50mg 57041-67-5 地氟烷标准品 Desflurane 0.5ml 67429-44-1 地氟烷相关物质A标准品 0.1ml 58-28-6 盐酸去甲咪嗪标准品 Desipramine Hydrochloride 125mg 17598-65-1 去乙酰毛花苷丙标准品 Deslanoside 100mg 24939-17-1 脱甲氧基姜黄素标准品 De Anti-ARIP2a/FITC 荧光素标记激活素受体2A/激活素受体相互作用蛋白2a抗体IgG Anti-ARIP2B/FITC 荧光素标记激活素受体2B/激活素受体相互作用蛋白2b抗体IgG Anti-Aromatase P450/FITC 荧光素标记芳香化酶蛋白抗体IgG Anti-Aromatase P450/FITC 荧光素标记芳香化酶/细胞色素P450/P450抗体IgG Anti-ART/FITC 荧光素标记胶质细胞系源性神经营养因子GDNF的一种抗体IgG Anti-ASCL1/MASH1 /FITC 荧光素标记神经母细胞特异性转移因子抗体IgG Anti-ASIC1/BNaC2/FITC 荧光素标记酸敏感离子通道1抗体IgG Anti-ASK1/MAPKKK5 /FITC 荧光素标记细胞凋亡信号调节激酶1/丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶5抗体IgG Anti-ASK1(phospho Ser83) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1抗体IgG Anti-phospho-ASK1(Thr845) /FITC 荧光素标记兔抗人、小鼠磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1抗体IgG Anti-ASK1(phospho Ser967) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1抗体IgG Anti-ASPP1/FITC 荧光素标记p53凋亡刺激蛋白1抗体IgG Anti-ASPP2/FITC 荧光素标记P53凋亡刺激蛋白2抗体IgG 中国仓鼠卵巢细胞;CHO-HCV-p7Anti-AT/AGT /FITC 荧光素标记血管紧张素原抗体IgG Anti-AT1/FITC 荧光素标记血管紧张素I抗体IgG Anti-AT1R/FITC 荧光素标记血管紧张素Ⅱ-1型受体抗体IgG Anti-AT2R/FITC 荧光素标记血管紧张素Ⅱ-2型受体抗体IgG Anti-ATF1/FITC 荧光素标记活化复制因子1抗体IgG 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |