细胞名称 牛肾细胞；MDBK(NBL-1) 形态特性 上皮样 生长特性 贴壁生长 特征特性 1957年2月18日，Madin SH和Darby NB从一只表观正常的成年牛肾脏建立了MDBK细胞株，可用于定量检测逆转录病毒的复制。 培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS 传代方法 1:2~1:4传代，每周换液2次。 传代情况 P116 冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测 培养法（-） STR 同工酶 染色体 产品图片：
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用： 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28－2003 中4.62，GB/T4789.11－2003)。 英文名称： CD36
肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养（GB标准） 英文名称： KLK11
葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用： 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28－2003 中4.1 GB/T4789.11－2... 英文名称： CD97
哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用： 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验，还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称： NTRK3
血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用： 加入脱纤维羊血或兔血，制成血琼脂培养基，用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10－... 英文名称： HA
胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用： 可广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称： HA
Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用： 试剂A和试剂B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。 英文名称： SPARCL1
PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于100ml（026070）中配成PALCAM琼脂。 英文名称： IL1RL1
李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于200ml（026040）中配成LB2增菌液。 英文名称： IL13RA1
李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026040）中配成LB1增菌液。 英文名称： PECAM1
EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用： 每支添加于225ml（026010）中配成EB增菌液。 英文名称： TNF 100760-200501 奥美拉唑钠 对照品 含量测定 100mg 100762-200501 异环磷酰胺化合物Ⅲ 对照品 检查 50mg 100763-200501 盐酸地匹福林 对照品 含量测定（HPLC） 50mg 100764-200501 盐酸地匹福林前体 对照品 检查（HPLC） 50mg 100768-200501 盐酸贝那普利 对照品 含量测定（HPLC） 100mg 100769-200401 喷昔洛韦 对照品 含量测定（HPLC） 50mg 100781-200501 格列美脲杂质1 （4-[2-(3-乙基-4-甲基-2-氧-3-吡咯啉-1-甲酰胺基）乙基]苯磺酰胺甲酸乙酯） 对照品 HPLC法有关物质检查 50mg 100782-200401 盐酸阿扎司琼 对照品 HPLC法含量测定 100mg 100783-200401 盐酸普萘洛尔 对照品 溶出度检查 50mg 100800- 氟伐他汀钠 对照品 含量测定（HPLC） 100mg 100802-200501 对氨基酚 对照品 TLC检查 100mg 100807-200501 盐酸赛利洛尔 对照品 含量测定（UV） 100mg 100808-200501 阿卡波糖 对照品 含量测定（HPLC） 100mg 100812-200501 盐酸米安色林 对照品 UV法含量测定 100mg 100813-200501 维库溴铵 对照品 含量测定（HPLC） 50mg 100815-200501 富马酸喹硫平 对照品 含量测定（UV） 100mg 100816-200501 氮磷汀 对照品 含量测定（HPLC） 50mg 100817-200501 曲昔匹特 对照品 含量测定（UV） 100mg 100823-200501 盐酸奈替芬 对照品 含量测定（HPLC） 100mg 100824-200501 碳酸钙 对照品 溶出度检查 100mg 100825-200501 甲磺酸氨氯地平 对照品 含量测定（HPLC） 100mg 100827-200501 琥珀酸甲泼尼龙 对照品 含量测定（HPLC） 100mg 100828-200501 甲泼尼龙 对照品 HPLC法含量测定 小鼠L选择素 Mouse mucin-5 subtype B,MUC5B ELISA kit 小鼠粘蛋白/粘液素5B Mouse pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP ELISA Kit 小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽 Mouse single stranded DNA Antibody,ssDNA ELISA Kit 小鼠抗单链DNA抗体/变性DNA抗体 Mouse phosphatidylserine,PS ELISA Kit 小鼠磷脂酰丝氨酸 Mouse choline phosphoglyceride,PC/CPG ELISA Kit 小鼠胆碱磷酸甘油酯 Mouse Beta-Defensins, Beta-DF ELISA Kit 小鼠β-防御素 Mouse Cross-linked Carboxy-terminal telopeptide of type I collagen, I CTP ELISA Kit 小鼠Ⅰ型胶原交联羧基末端肽 Mouse neurofilament protein,NF ELISA Kit 小鼠神经丝蛋白 Mouse small nuclear ribonucleoprotein,snRNP/Sm ELISA Kit 小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗体 Mouse serine/threonine protein kinase,STK ELISA Kit 小鼠丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶 Mouse Lactate Dehydrogenase,LDH ELISA Kit 小鼠乳酸脱氢酶 牛肾细胞；MDBK(NBL-1)Mouse anti-red cell antibody ELISA Kit 小鼠抗红细胞抗体 Mouse carcinoembryonic antign,CEA ELISA Kit 小鼠癌胚抗原 Mouse Cluster of differentiation 19,CD19 ELISA Kit 小鼠CD19分子 Mouse Cluster of differentiation 3 操作方法:
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。
4. 37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。
(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟）
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |
