细胞名称 抗乳铁蛋白小鼠杂交瘤细胞;5B4 形态特性 淋巴母细胞样 生长特性 半贴壁生长 特征特性 可产生单克隆抗体,抗原为乳铁蛋白。 培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS 传代方法 保持细胞密度在1×105~1×106 cells/ml之间,每周换液2~3次 传代情况 不详 冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS 支原体检测 阴性 STR - 同工酶 染色体 产品图片:
 细胞培养的优点: 1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。 二.细胞处理: 1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 对于悬浮细胞,传代可参考以下方法: 方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 匹克氏肉汤基础 规格: 100g 作用: 用于溶血性链球菌的增菌培养(参考GB/T4789.28-2003 中4.62,GB/T4789.11-2003)。 英文名称: CD36 肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽孢杆菌的培养(GB标准) 英文名称: KLK11 葡萄糖肉浸液肉汤 规格: 250g 作用: 用于溶血性链球菌及其它营养要求较高的细菌的增菌培养(GB/T4789.28-2003 中4.1 GB/T4789.11-2... 英文名称: CD97 哥伦比亚琼脂培养基 规格: 250g 作用: 用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验,还用于药品中梭菌的检测。(《中华人民共和国药典》201... 英文名称: NTRK3 血琼脂培养基基础 规格: 250g 作用: 加入脱纤维羊血或兔血,制成血琼脂培养基,用于营养要求较高的细菌的培养及溶血试验(GB 4789.10-... 英文名称: HA 胰蛋白胨大豆肉汤培养基 规格: 250g 作用: 可广泛应用于细菌的培养,特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡... 英文名称: HA Fraser肉汤增菌液FB1配套试剂 规格: 2x5支 作用: 试剂A和试剂B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。 英文名称: SPARCL1 PALCAM琼脂冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM琼脂。 英文名称: IL1RL1 李氏增菌液LB2冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于200ml(026040)中配成LB2增菌液。 英文名称: IL13RA1 李氏增菌液LB1冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。 英文名称: PECAM1 EB增菌液冻干配套试剂 规格: 10支 作用: 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。 英文名称: TNF 936-201005 0.5g 关黄柏 TLC法鉴别 120937-201007 10mg 蛇胆汁 TLC法鉴别 120938-200104 0.25g 首乌藤 TLC法鉴别 120939-200705 1.0g 独活 TLC法鉴别 120940-2001010 1.0g 三七 TLC法鉴别 120941-200807 2.0g 干姜 TLC法鉴别 120942-200907 4.0g 广山楂 TLC法鉴别 120943-200402 0.6g 天麻 TLC法鉴别 120944-200608 1.0g 白芷(杭白芷) TLC法鉴别 120945-201008 2.0g 西青果 TLC法鉴别 120946-9903 3.0g 防风 TLC法鉴别 120947-200907 10g 返魂草(麻叶千里光) TLC法鉴别 120948-200903 1.0g 郁金(温郁金) TLC法鉴别 120949-201005 1.5g 茵陈(滨蒿) TLC法鉴别 120950-200706 1.0g 前胡(白花前胡) TLC法鉴别 120951-200704 1.0g 降香 TLC法鉴别 120952-201007 1.0g 桃仁(桃) TLC法鉴别 120953-200705 1.0g 饿蚂蝗 TLC法鉴别 120954-200204 0.5g 黄芩 TLC法鉴别 120955-200607 1.0g 紫菀 TLC法鉴别 120956-200505 1.0g 墨旱莲 TLC法鉴别 120958-200605 1.0g 瓦松 TLC法鉴别 120959-200303 体IgG Anti-apo-D /FITC 荧光素标记载脂蛋白D抗体IgG Anti-Apo-E/FITC 荧光素标记载脂蛋白E抗体IgG Anti-ApoH/FITC 荧光素标记载脂蛋白H抗体IgG Anti-Apollon/FITC 荧光素标记Apollon凋亡抑制蛋白抗体IgG Anti-APP/FITC 荧光素标记APP淀粉样肽前体蛋白抗体IgG Anti-phospho-APP(phospho Thr668) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白(p-APP Thr668)抗体IgG Anti-APP695/770 /FITC 荧光素标记淀粉样肽前体蛋白抗体IgG Anti-APPL1/FITC 荧光素标记抗衔接因子蛋白含pH域磷酸酪氨酸结合域和亮氨酸拉链基元1抗体IgG Anti-APS/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠APS抗体IgG Anti-APS(Ser598)/FITC 荧光素标记磷酸化APS抗体IgG anti-AQP1/FITC 荧光素标记水通道蛋白-1抗体IgG Anti-AQP-2/FITC 荧光素标记水通道蛋白-2蛋白抗体IgG Anti-AQP-3/FITC 荧光素标记水通道蛋白-3抗体IgG Anti-AQP4/FITC 荧光素标记水通道蛋白-4蛋白抗体IgG Anti-AQP5/FITC 荧光素标记水通道蛋白-5抗体IgG Anti-AQP7/FITC 荧光素标记水通道蛋白-7抗体IgG 抗乳铁蛋白小鼠杂交瘤细胞;5B4Anti-AQP9/FITC 荧光素标记水通道蛋白-9抗体IgG Anti-AR/FITC 荧光素标记雄激素受体抗体IgG Anti-AKR1B1/ADR/FITC 荧光素标记醛糖还原酶抗体IgG Anti-phospho-AR ( p-Ser580)/FITC 荧光 操作方法: 1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富,可提高转化效率)。 4. 37℃,225 rpm复苏60分钟或30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control pUC19计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60分钟) 5. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 或LB培养基上。 |