细胞传代步骤：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞简介：
大鼠胚成纤维分离自胚胎；成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的胚胎成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。该细胞常用作ES细胞培养常用的饲养层细胞，能产生抑制ES细胞自主分化和促进ES细胞增殖的因子，故能有效地促进ES细胞的增殖并维持其未分化特性和多潜能性，且分泌效果优于外源添加的一些因子，而且可以为ES细胞的培养提供类似于体内的微环境，故在研究哺乳动物ES细胞中得到广泛使用。 方法简介：
实验室分离的大鼠胚成纤维采用消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 质量检测：
实验室分离的大鼠胚成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 产品名称 | 大鼠胚成纤维细胞 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 组织来源 | 胚胎 | 产品货号 | YS-01X8247 | 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
培养信息：
培养基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等 换液频率：每2-3天换液一次 生长特性：贴壁 细胞形态：成纤维细胞样 传代特性：可传3代左右 消化液：0.25% 培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 大鼠胚成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。 
细胞复苏步骤:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 公司正在出售的产品：
大鼠细胞球蛋白(CYGB)试剂盒 ，英文名： CYGB ELISA Kit Mouse growth hormone releasing peptide (GHRP) ELISA Kit 小鼠生长激素释放多肽(GHRP)试剂盒 Mouseplateletactivatingfactor,PAFELISAKIT 小鼠血小板活化因子(PAF)pcr检测试剂盒分装 CLIAKitforHSP47ELISAKit大鼠热休克蛋白47 细胞L-乳酸比色法定量试剂盒20次 ELISAKitIL-1α大鼠白介素1α 小鼠C反应蛋白 英文名称： C-reactive protein 英文缩写： CRP 小鼠CXC趋化因子受体3 英文名称： CXC chemokine receptor 3 英文缩写： CXCR3 小鼠CXC趋化因子配体16 英文名称： CXC chemokine ligand 16 英文缩写： CXCL16 小鼠CXCL1/KC 英文名称： CXC chemokine ligand 1 英文缩写： CXCL1/KC FOXD4L2蛋白抗体 细胞质PSD95相互作用因子抗体 PCSK9重组小鼠 PCSK9 / NARC1 蛋白 Protein CD133 造血干细胞抗原(多肽抗原 0.5mgCD133 造血干细胞抗原(多肽抗原) H1F0重组人 H1F0 / Histone H1 蛋白 Protein FCER2 Protein Human 重组人 CD23 / FCER2 蛋白 CD63 Protein Rat 重组大鼠 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白 (Fc 标签) CD133 造血干细胞抗原(多肽抗原 0.5mgCD133 造血干细胞抗原(多肽抗原) FCER2 Protein Human 重组人 CD23 / FCER2 蛋白 PCSK9重组小鼠 PCSK9 / NARC1 蛋白 Protein CD63 Protein Rat 重组大鼠 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白 (Fc 标签) H1F0重组人 H1F0 / Histone H1 蛋白 Protein 大鼠胚成纤维细胞小鼠过氧化酶(GSH-Px)pcr检测试剂盒 Human retinol binding protein 4 (RBP-4) ELISA Kit 人结合蛋白4(RBP-4)试剂盒 Humanadvancedglycationendproducts,AGEsELISAKit 人晚期糖基化终末产物(AGEs)pcr检测试剂盒分装 HumanAi-SomaticMuscleAibody,ASA试剂盒人抗骨骼肌抗体(ASA)试剂盒规格：96T/48T 植物细胞转染试剂盒10次 Humanueinsulin,TIELISAKit人真胰岛素(TI)试剂盒规格：96T/48T 细胞冻存步骤:
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
|
