细胞传代步骤：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞简介：
兔血管外膜成纤维分离自血管外膜组织；血管外膜是由疏松结缔组织组成，其中含螺旋状或纵向分布的弹性纤维和胶原纤维。血管壁的结缔组织细胞以成纤维细胞为主，当血管受损伤时，成纤维细胞具有修复外膜的能力。有的动脉中膜和外膜的交界处，有密集的弹性纤维组成的外弹性膜。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的血管外膜成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。血管外膜成纤维细胞是血管外膜的主要组成细胞之一，其主要生理功能合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。 方法简介：
公司实验室分离的兔血管外膜成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 质量检测：
公司实验室分离的兔血管外膜成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 产品名称 | 兔血管外膜成纤维细胞 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 组织来源 | 血管组织 | 产品货号 | YS-01X7110 | 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 成纤维细胞样 传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳 消化液 0.25% 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 
细胞复苏步骤:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 公司正在出售的产品：
大鼠接触蛋白4(CN4)试剂盒 ，英文名： CN4 ELISA Kit Mouse neuophil elastase (NE) ELISA Kit 小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)试剂盒 RatplateletmembraneglycoproteinⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢaELISAKit 大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)试剂盒 96T/48T 进口分装 CLIAKitforFishi-iodothyronine,T3ELISAKit鱼类三甲状腺原 细胞基质金属蛋白酶(MMP-1)活性荧光定量试剂盒20次 RatovalbuminspecificIgE,OVAsIgEELISAKit大鼠卵清蛋白特异性IgE(OVAsIgE)试剂盒规格：96T/48T 小鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)试剂盒 96T/48T 小鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)试剂盒 96T/48T 小鼠胱天蛋白酶8(Casp-8)试剂盒 96T/48T 小鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)试剂盒 96T/48T 2'-5'-寡腺苷酸合成酶2抗体 小鼠抗(AT)ELISA 试剂盒 96T/48T Rat ai monocyte aibody (AMA) ELISA Kit 大鼠抗单核细胞抗体(AMA)试剂盒 HumanfibrinopeptideB,FPBELISAKit 人血纤肽/纤维蛋白肽B(FPB)试剂盒 96T/48T 进口分装 HumanAmebiasis试剂盒人阿米巴(Amebiasis)试剂盒规格：96T/48T 植物单酚氧化酶(monophenolase)活性比色法定量试剂盒20次 MonkeyIerleukin2,IL-2ELISAKit猴白介素2(IL-2)试剂盒规格：96T/48T 尿皮质素UCN3抗体 ERBB2重组恒河猴 HER2 / ErbB2 蛋白 Protein P19ARF p19ARF抑癌基因抗原 0.5mgP19ARF p19ARF抑癌基因抗原 CA8重组人 Carbonic Anhydrase VIII / CA8 蛋白 Protein DNASE1 Protein Human 重组人 DNASE1 / Deoxyribonuclease I / DNL1 蛋白 IFNA5 Protein Mouse 重组小鼠 IFNA5 / IFNaG 蛋白 兔血管外膜成纤维细胞P19ARF p19ARF抑癌基因抗原 0.5mgP19ARF p19ARF抑癌基因抗原 DNASE1 Protein Human 重组人 DNASE1 / Deoxyribonuclease I / DNL1 蛋白 ERBB2重组恒河猴 HER2 / ErbB2 蛋白 Protein IFNA5 Protein Mouse 重组小鼠 IFNA5 / IFNaG 蛋白 CA8重组人 Carbonic Anhydrase VIII / CA8 蛋白 Protein 细胞冻存步骤:
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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