细胞传代步骤：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞简介：
兔椎间盘纤维环分离自椎间盘组织；椎间盘是位于脊柱两椎体之间，由软骨板、纤维环、髓核组成的一个密封体。上下有软骨板，是透明软骨复盖于椎体上，下面骺环中间的骨面。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成，位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠，使纤维环成为坚实的组织，能承受较大的弯曲和扭转负荷。纤维环的前侧及两侧较厚，而后侧较薄。纤维环的前部有强大的前纵韧带，后侧的后纵韧带较窄、较薄。纤维环细胞密度为9000个细胞/mm3，其外层的细胞呈梭型，主要属于纤维细胞，内层细胞呈圆形，主要属于软骨细胞。在培养的情况下，用透射电镜观察则有许多共同的超微结构表现，它们的核较圆，核仁较明显。细胞质内可见大量的附有核糖体颗粒的粗面内质网和滑面内质网。细胞质内线粒体多，为椭圆形，有的可看到双层单位膜，由单位膜包绕初级深酶体和次级深酶体。细胞质内有一系列的扁平囊及小泡主成的高尔基复合体和分泌颗粒，纤维环细胞合成分泌蛋白多糖及胶原纤维的能力很旺盛，保证纤维环生理代谢活动所需的构造物质的供给。一但这种供给减少，纤维环的生物性能就会减弱，椎间盘开始退变。 方法简介：
公司实验室分离的兔椎间盘纤维环采用胶原酶-联合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 质量检测：
公司实验室分离的兔椎间盘纤维环经Ⅰ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 产品名称 | 兔椎间盘纤维环细胞 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 组织来源 | 椎间盘组织 | 产品货号 | YS-01X7132 | 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 梭形、多角形 |
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 梭形、多角形 传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳 消化液 0.25% 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 
细胞复苏步骤:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 公司正在出售的产品：
大鼠巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)试剂盒 ，英文名： MCSF ELISA Kit Mouse lipoprotein associated phospholipase A2 (Lp-PL-A2) ELISA Kit 小鼠脂蛋白相关0脂酶A2(Lp-PL-A2)试剂盒 Rat8-isoprostaglandin,8-iso-PGELISAKit 大鼠8异前列腺素(8-iso-PG)试剂盒 96T/48T 进口分装 CLIAKitforFN(HumanFibronectin)ELISAKit人纤连蛋白 细胞肌酸激酶同工酶肌肉型(CK-MM)活性酶连续循环比色法定量试剂盒20次 Ratperoxisomeproliferatorsactivatorreceptorsalpha,PPAR-αELISAKit大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)试剂盒规格：96T/48T 小鼠释放激素 英文名称： Mouse Gonadoopin-Releasing Hormone 英文缩写： GH 小鼠葡萄糖氧化酶 英文名称： Mouse Glucose Oxidase 英文缩写： GOD 小鼠胰高血糖素 英文名称： Mouse Glucagon 英文缩写： GC 小鼠葡萄糖60酸脱氢酶 英文名称： Mouse Glucose 6 Phosphate Dehydrogenase 英文缩写： G6PD 13号染色体开放阅读框32抗体 小鼠降钙素(CT)ELISA 试剂盒 96T/48T Pigme epithelium derived factor (PEDF) ELISA Kit 人色素上皮衍生因子(PEDF)试剂盒 HumangranulysinELISAKit 人颗粒溶素(granulysin)试剂盒 96T/48T 进口分装 Humanai-doublesandedDNA,dsDNA试剂盒人抗双链DNA抗体/天然DNA抗体(dsDNA)试剂盒规格：96T/48T 植物脊髓过氧化酶(MPO)活性高质敏感(DTNB)比色法定量试剂盒20次 HumanXC-chemokinereceptor1,XCR1ELISAKit人XC趋化因子受体1(XCR1)试剂盒规格：96T/48T 囊泡乙酰通道抗体 CA9重组狗 Carbonic Anhydrase IX / CA9 蛋白 Protein OAT-3(Organic anion transporter 3 0.5mgOAT-3(Organic anion transporter 3) 阴离子转运蛋白-3(抗原) CA13重组人 Carbonic Anhydrase XIII / CA13 蛋白 Protein EIF5A2 Protein Human 重组人 EIF5A2 蛋白 CTSH Protein Mouse 重组小鼠 Cathepsin H / CTSH 蛋白 兔椎间盘纤维环细胞OAT-3(Organic anion transporter 3 0.5mgOAT-3(Organic anion transporter 3) 阴离子转运蛋白-3(抗原) EIF5A2 Protein Human 重组人 EIF5A2 蛋白 CA9重组狗 Carbonic Anhydrase IX / CA9 蛋白 Protein CTSH Protein Mouse 重组小鼠 Cathepsin H / CTSH 蛋白 CA13重组人 Carbonic Anhydrase XIII / CA13 蛋白 Protein 细胞冻存步骤:
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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