细胞简介：

兔巩膜成纤维分离自巩膜组织，巩膜是眼球壁的主要组成之一。是眼球纤维膜的后5/6部分。前方联接角膜，后方与视神经的鞘膜延续。巩膜在视神经穿出部附近厚，愈前愈薄，在肌腱附着处又复增厚。其与角膜交界处，外面有环形的角膜沟，深部有巩膜静脉窦。小儿的巩膜为浅蓝色，成年为白色，老年因脂肪沉着而带黄色。巩膜结构坚韧，有支持和保护眼内组织的作用。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁体外培养，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

实验室分离的兔巩膜成纤维采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：

实验室分离的兔巩膜成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔巩膜成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞传代步骤：

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞复苏步骤:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞冻存步骤:

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
公司正在出售的产品：

兔儿茶酚胺(CA)ELISA 试剂盒

Human ypsinogen activation peptide (TAP) ELISA Kit 人原激活肽(TAP)试剂盒

Humanmorbillivirus,MVELISAKit 人麻疹病毒(MV)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanglathione,GSH试剂盒人(GSH)试剂盒规格：96T/48T

组织单胺氧化酶B型(MAO-B)活性荧光定量试剂盒20次

Humanmorbillivirus,MVELISAKit人麻疹病毒(MV)试剂盒规格：96T/48T

人着丝粒蛋白B(CENPB)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human CENPB (Cenomere Protein B) ELISA Kit

人中心体蛋白110(CEP110)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human CEP110 (Cenosomal Protein 110kDa) ELISA Kit

人酶VB(CA5B)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human CA5B (Carbonic Anhydrase VB, Mitochondrial) ELISA Kit

人丝切蛋白1(CFL1)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human CFL1(Cofilin 1, Non-Muscle) ELISA Kit

ZYG11BL蛋白抗体

豚鼠白介素4(IL4)试剂盒 ，英文名： IL4 ELISA Kit

Human stem cell factor receptor (SCFR) ELISA Kit 人干细胞因子受体(SCFR)试剂盒

rabbitneuroophin3,-3ELISAKit 兔子神经营养因子3(-3)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforAVP(Humanargininevasopressin)ELISAKit人精加压素

线粒体蛋白印迹电泳内参蛋白抗体(1000倍)20微克

Rabbitai-neuophilgranulesaibody,ANGAELISAKit兔子抗中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)试剂盒规格：96T/48T

磷酸化原癌基因c-Raf抗体

FCAR重组大鼠 CD89 / FCAR 蛋白 Protein

HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P 0.5mgHHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P) 人类疱疹病毒8抗原

EPOR重组人 EPO Receptor / EPOR 蛋白 Protein

IP6K1 Protein Human 重组人 IHPK1 蛋白 (His & GST 标签)

CA8 Protein Mouse 重组小鼠 Carbonic Anhydrase VIII / Car8 蛋白

兔巩膜成纤维细胞HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P 0.5mgHHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P) 人类疱疹病毒8抗原

IP6K1 Protein Human 重组人 IHPK1 蛋白 (His & GST 标签)

FCAR重组大鼠 CD89 / FCAR 蛋白 Protein

CA8 Protein Mouse 重组小鼠 Carbonic Anhydrase VIII / Car8 蛋白

EPOR重组人 EPO Receptor / EPOR 蛋白 Protein