BC027382人类似cDNA顺序 ELISA试剂盒 SS人生长抑素 CT人沙眼衣原体ELISA检测 SS小鼠生长抑素 S100A9人S100钙结合蛋白A9/钙粒蛋白BELISA检测 ST1人基质裂解素 S100A8人S100钙结合蛋白A8/钙粒蛋白AELISA检测 ST2人基质裂解素 Pim1人前病毒整合位点1ELISA检测 ST3人基质裂解素 PEA人绿脓杆菌外毒素AELISA检测 St-Ag人伤寒抗原 FLU A人流感病毒AELISA检测 BC027382人类似cDNA顺序 ELISA试剂盒途: 用GsaR人促胃液素受体ELISA试剂盒的含量。 St-Ag人伤寒抗原ELISA检测 HBsAg人乙型肝炎表面抗原ELISA检测 sTfR人可溶性转铁蛋白受体 HBcAb人抗乙型肝炎病毒核心抗体ELISA检测 STK大鼠丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶 HBcAb-IgM人抗乙型肝炎病毒核心IgM抗体ELISA检测 STK人丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶 HBsAb人抗乙型肝炎病毒表面抗体ELISA检测 STK小鼠丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶 HBeAb人抗乙型肝炎病毒e抗体ELISA检测 sTRAIL大鼠可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体ELISA检测 EHF人抗流行性出血热病毒抗体IgM ELISA检测 sTREM-1人可溶性髓系细胞触发受体-1 anti-RV人抗狂犬病毒抗体ELISA检测 步骤一 双抗体夹心法 1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。 2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。 3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。 4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。 5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。 然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 |