Serpina3g人丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3GELISA试剂盒 PLCγ1人磷酯酶Cγ链 人Smad7 ELISA检测 PLC人磷酯酶C 人肿瘤相关抗原ELISA检测TAA PLGA人纤溶酶原激活剂 人TGF-β诱导早期基因1ELISA检测TIEG1 PLGF大鼠胎盘生长因子ELISA检测 人肿瘤血管生长因子ELISA检测TAF PLGF人胎盘生长因子 人细胞角蛋白20ELISA检测CK-20 Plg人纤溶酶原 人细胞角蛋白19ELISA检测CK-19 Serpina3g人丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3GELISA试剂盒途: 用GsaR人促胃液素受体ELISA试剂盒的含量。 Plg兔子纤溶酶原ELISA检测 人细胞角蛋白18ELISA检测CK-18 PLN人受磷蛋白 人嗜铬蛋白AELISA检测CgA PLP人蛋白脂质蛋白抗体 人视网膜母细胞瘤抑制蛋白ELISA检测pRB PLP人甲状旁腺激素样蛋白 人生长调节致癌基因α/黑素瘤生激因子ELISA检测GROα/CXCL1/MGSA PLSCR1人磷脂爬行酶1 人成熟促进因子ELISA检测MPF PL人胎盘泌乳素 人去唾液酸糖蛋白受体ELISA检测AGSPR pMHC人肽-主要组织相容性复合体复合物 人可溶性转铁蛋白受体ELISA检测sTfR 步骤一 双抗体夹心法 1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。 2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。 3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。 4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。 5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。 然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 |