GS人凝溶胶蛋白ELISA试剂盒 NADPH人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 aGT小鼠血管紧张素原酶联免疫 NADPH小鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 Hsp-60小鼠热休克蛋白60酶联免疫 NAG人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 CG小鼠绒毛膜促性腺激素酶联免疫 NAIP人神经元凋亡抑制蛋白 MDA小鼠二醛酶联免疫 NAP-2/CXCL7人中性粒细胞趋化蛋白2 SOD小鼠超氧化物歧化酶酶联免疫 GS人凝溶胶蛋白ELISA试剂盒途: 用GsaR人促胃液素受体ELISA试剂盒的含量。 NAP人中性粒细胞碱性磷酸酶 C-Peptide小鼠C肽酶联免疫 NA大鼠去甲肾上腺素ELISA检测 HSP gp96小鼠热休克蛋白糖蛋白96酶联免疫 NA人去甲肾上腺素 CH50小鼠血清总补体酶联免疫 NA人神经氨酸酶 B7-2/sCD86小鼠可溶性CD86酶联免疫 NA兔去甲肾上腺素ELISA检测 INS小鼠胰岛素酶联免疫 n-DNA-Ab人抗天然脱氧核糖核酸抗体 HIF-1α小鼠低氧诱导因子1α酶联免疫 NE-B人重酒石酸去甲肾上腺素 NN-T4小鼠新生甲状腺素酶联免疫 nephrin人肾病蛋白 Amylin小鼠胰淀素酶联免疫 NE人中性粒细胞弹性蛋白酶 Free-T3小鼠游离三碘甲状腺原氨酸酶联免疫 步骤一 双抗体夹心法 1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。 2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。 3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。 4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。 5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。 然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 |