SAA人血清淀粉样蛋白AELISA试剂盒 M-CSF小鼠巨噬细胞集落刺激因子 OSM小鼠抑瘤素M酶联免疫 MCT人肥大细胞类胰蛋白酶 PDGFsR-α小鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α酶联免疫 MCV人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体 PDGF-AB小鼠血小板衍生生长因子AB酶联免疫 MDA人二醛 P-Selectin/CD62P小鼠P选择素酶联免疫 MDA小鼠二醛 PAL小鼠L苯氨酸解氨酶酶联免疫 SAA人血清淀粉样蛋白AELISA试剂盒 途: 用GsaR人促胃液素受体ELISA试剂盒 的含量。 MDC/CCL22大鼠巨噬细胞来源的趋化因子ELISA检测 sCD30L小鼠可溶性CD30配体酶联免疫 MDC/CCL22人巨噬细胞来源的趋化因子 SCF/MGF小鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子酶联免疫 MDC/CCL22小鼠巨噬细胞来源的趋化因子 SDF-1β/CXCL12小鼠基质细胞衍生因子1β酶联免疫 MEPE人细胞外基质磷酸糖蛋白 TGF-β1小鼠转化生长因子β1酶联免疫 Methylase人甲基化酶 TNFsR-Ⅰ小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ酶联免疫 Methylase小鼠甲基化酶 TNFsR-Ⅱ小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ酶联免疫 MF/MPF人促有丝分裂因子 TNF-α小鼠肿瘤坏死因子α酶联免疫 步骤一 双抗体夹心法 1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。 2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。 3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。 4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。 5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。 然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 |