CAD人胱天蛋白酶激活的脱氧核糖核酸酶ELISA试剂盒 AACV-A大鼠活化素ELISA检测 ALP-B人骨特异性碱性磷酸酶B酶联免疫 AACV-A猪活化素ELISA检测 ALP人碱性磷酸酶酶联免疫 AAV人腺相关病毒 ALT/GPT人氨酸转氨酶/谷转氨酶酶联免疫 AAV人腺相关病毒ELISA检测 AMA IgA人抗髓磷脂抗体IgA酶联免疫 ABA 植物激素脱落酸ELISA检测 AMA人抗单核细胞抗体酶联免疫 CAD人胱天蛋白酶激活的脱氧核糖核酸酶ELISA试剂盒途: 用GsaR人促胃液素受体ELISA试剂盒的含量。 6-keto-PGF1a小鼠6酮前列腺素F1a AFP-L2人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2酶联免疫ABAb人抗脑组织抗体 AMA人抗心肌抗体酶联免疫 ABAb兔抗脑组织抗体ELISA检测 AMBP人α1微球蛋白/bikunin前体酶联免疫 ABCA1人腺苷三磷酸结合盒转运体A1 Amebiasis人阿米巴酶联免疫 ABCG2人腺苷三磷酸结合盒转运体G2 AMPK人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶酶联免疫 ABM-Ab人抗肺泡基底膜抗体 AMS/AMY人α淀粉酶酶联免疫 ABMPR-1A大鼠骨成型蛋白受体1ELISA检测 Amylin人胰淀素酶联免疫 ABP人雄激素结合蛋白 ANA人抗核抗体酶联免疫 AC-1人腺苷酸环化酶1 ANA人抗核仁抗体酶联免疫 ACA/CENP人抗着丝点抗体 ANA人抗中性粒细胞抗体酶联免疫 ACA-IgA人抗心磷脂抗体IgA ANF人心纳素酶联免疫 步骤一 双抗体夹心法 1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。 2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。 3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。 4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。 5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。 然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 |