MPO-ANCA IgG人髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgGELISA试剂盒 sRANKL人可溶性核因子κB受体活化因子配基酶联免疫 PKA人蛋白激酶A酶联免疫 1,25-OH2D3/DVD/DHVD 3人1,25二羟基维生素D3酶联免疫 PI小鼠胰岛素原酶联免疫 histon-H2b人组蛋白H2b酶联免疫 PI人胰岛素原酶联免疫 OPG人骨保护素酶联免疫 PI大鼠胰岛素原酶联免疫 MPO-ANCA IgG人髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgGELISA试剂盒途: 用GsaR人促胃液素受体ELISA试剂盒的含量。 BMPR-Ⅱ人骨成型蛋白受体Ⅱ酶联免疫 PIPLC人磷酯酰肌醇特异性磷酯酶C酶联免疫 BMPR-1A人骨成型蛋白受体1A酶联免疫 Pim1人前病毒整合位点1酶联免疫 BMP-4人骨成型蛋白4酶联免疫 pIKBα人磷酸化核因子κB抑制蛋白α酶联免疫 BMP-2人骨成型蛋白2酶联免疫 pIKBα大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α酶联免疫 cAMP人环磷酸腺苷酶联免疫 PI3K小鼠磷酸肌醇3激酶酶联免疫 MASP人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶酶联免疫 PI3K人磷酸肌醇3激酶酶联免疫 CDK-7人周期素依赖性激酶7酶联免疫 PI3K大鼠磷酸肌醇3激酶酶联免疫 CDK-2人周期素依赖性激酶2酶联免疫 PI Ab-IgG/IgM小鼠磷脂酰肌醇抗体IgG/IgM酶联免疫 CDK-1人周期素依赖性激酶1酶联免疫 PI Ab-IgG/IgM人磷脂酰肌醇抗体IgG/IgM酶联免疫 步骤一 双抗体夹心法 1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。 2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。 3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。 4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。 5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。 然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 |