细胞传代步骤：

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞简介：

小鼠食管成纤维分离自食管组织；食管是咽和胃之间的消化管，食管在系统发生上起初很短，随着颈部的伸长和心肺的下降，而逐渐增长。食管可分为颈段、胸段和腹段。脊椎动物食管的颈段位于气管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之间的纵膈内，胸段通过膈孔与腹腔内腹相连，腹段很短与胃相连。在发育过程中，食管的上皮细胞增殖，由单层变为复层，食管使管腔变狭窄，甚至一度闭锁，以后管腔又重新出现。哺乳动物的食管结构上由内向外分四层：黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜。其中，黏膜层，包括上皮、固有层和黏膜肌层。食管的外膜，由疏松结缔组织构成，富有血管、淋巴管及神经。主要包含食管成纤维细胞，成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

实验室分离的小鼠食管成纤维采用 - 胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：

实验室分离的小鼠食管成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传2-3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

小鼠食管成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞复苏步骤:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

公司正在出售的产品：

大鼠糖原0酸化酶B(PYGB)试剂盒 ，英文名： PYGB ELISA Kit

Mouse carbonic anhydrase (CA) ELISA Kit 小鼠酶(CA)试剂盒

RatAndrostenedione,ASDELISAKit 大鼠雄(ASD)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHNP1-3(Humanneuophilpeptide1-3)ELISAKit人中性粒细胞防御素1-3

细胞PKCζ激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitFlt3L大鼠FMS样酪激酶3配体

兔子免疫球蛋白M(IgM)试剂盒   96T/48T

兔子免疫球蛋白G(IgG)试剂盒   96T/48T

兔子免疫球蛋白E(IgE)试剂盒   96T/48T

兔子免疫球蛋白A(IgA)试剂盒   96T/48T

血管紧张素转换酶ACE1抗体

小鼠白介素4(IL-4)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat heat shock protein 96 (HSP gp96) ELISA Kit 大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)试剂盒

Humaniegrin-linkedkinase1,ILK-1ELISAKit 人整合素连接激酶1(ILK-1)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCalreticulin,C试剂盒人钙网蛋白(C)试剂盒规格：96T/48T

重组逆转录病毒稳态表达细胞克隆冻存试剂盒50次

Humansolubleierleukin-1receptorⅡ，IL-1sRⅡELISAKit人白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)试剂盒规格：96T/48T

p21激活激酶1抗体

GFP重组水母 GFP 蛋白 Protein

TRAIL/Apo2L (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 0.5mgTRAIL/Apo2L (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand) 坏死因子相关凋亡诱导配体/凋亡素2配体抗原

AMICA1重组人 JAML / AMICA 蛋白 Protein

GFER Protein Human 重组人 GFER / ALR 蛋白

IL32 Protein Human 重组人 Interleukin-32 / IL-32 蛋白 (isoform alpha, His 标签)

小鼠食管成纤维细胞PLAU/uPA (Plasminogen activator,urokinase 0.5mgPLAU/uPA (Plasminogen activator,urokinase) 型纤溶酶原激活因子(多肽)

GFER Protein Human 重组人 GFER / ALR 蛋白

HA重组甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

FGF1 Protein Human 重组人 aFGF / FGF1 蛋白

CDK1重组人 CDC2 Kinase / CDK1 蛋白 (GST 标签) Protein

细胞冻存步骤:

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取