细胞传代步骤：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞简介：
兔真皮成纤维分离自真皮组织；皮肤组织来源包括头部、脸部、手、脚、腿、背部、腹部、包皮等体表部位皮肤，可依据需求选用；真皮，位于表皮深层，向下与皮下组织相连，真皮结缔组织的胶原纤维和弹性纤维互相交织在一起，埋于基质内。其内分布着各种结缔组织细胞和大量的胶原纤维弹性纤维，使皮肤既有弹性，又有韧性。其由两层组成——乳头层与网状层。真皮的结构组成是胶原蛋白、弹性纤维以及基质。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的真皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。真皮成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持组织的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。 方法简介：
实验室分离的兔真皮成纤维采用先消化、后-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 质量检测：
实验室分离的兔真皮成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 产品名称 | 兔真皮成纤维细胞 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 组织来源 | 皮肤 | 产品货号 | YS-01X8477 | 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
培养信息：
培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率：每2-3天换液一次 生长特性：贴壁 细胞形态：成纤维细胞样 传代特性：可传5代左右；3代以内状态佳 消化液：0.25% 培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 兔真皮成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。 
细胞复苏步骤:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 公司正在出售的产品：
大鼠环0腺苷(cAMP)试剂盒 ，英文名： cAMP ELISA Kit Rabbit maix metalloproteinase 1 (MMP-1) ELISA Kit 兔基质金属蛋白酶1(MMP-1)试剂盒 脑膜奈瑟菌W135群(NM- W135)核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T CLIAKitforMouseLactateDehydrogenase,LDHELISAKit小鼠乳酸脱氢酶 体液过氧化氢(HYDROGENPEROXIDE)活性荧光定量试剂盒20次 ELISAKit2,3-dinor-TXB2人2,3Dinor血栓烷B2 猪血管生成素2(ANG-2)试剂盒 组装/原装 猪血管生成素1(ANG-1)试剂盒 组装/原装 猪血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)试剂盒 组装/原装 猪血管内皮细胞生长因子A（VEGF-A）试剂盒 组装/原装 微管蛋白聚合促进蛋白24 G蛋白信号转导调节因子8抗体 VTN重组小鼠 Vitronectin / VTN 蛋白 (His 标签) Protein Ag-ARC(ARG3.1/ARC, Activity-regulated cytoskeleton-associated protein 0.5mgAg-ARC(ARG3.1/ARC, Activity-regulated cytoskeleton-associated protein) ARC(多肽抗原) TLR4重组人 TLR4 / CD284 蛋白 (His 标签) Protein BCL2L2 Protein Human 重组人 BCL-W / BCL2L2 蛋白 (His 标签) ERBB3 Protein Rat 重组大鼠 HER3 / ErbB3 蛋白 Ag-ARC(ARG3.1/ARC, Activity-regulated cytoskeleton-associated protein 0.5mgAg-ARC(ARG3.1/ARC, Activity-regulated cytoskeleton-associated protein) ARC(多肽抗原) BCL2L2 Protein Human 重组人 BCL-W / BCL2L2 蛋白 (His 标签) VTN重组小鼠 Vitronectin / VTN 蛋白 (His 标签) Protein ERBB3 Protein Rat 重组大鼠 HER3 / ErbB3 蛋白 TLR4重组人 TLR4 / CD284 蛋白 (His 标签) Protein 兔真皮成纤维细胞猪细胞色素氧化酶(CC0)试剂盒 Human maix metalloproteinase 3 (MMP-3) ELISA Kit 人基质金属蛋白酶3(MMP-3)试剂盒 RabbitBcl-2AssaciatedXprotein,BAXELISAKit 兔Bcl-2相关X蛋白(BAX)试剂盒分装 CLIAKitforai-CMVIgG(Humanai-cytomegalovirusIgGaibody,ai-CMVIgG)ELISAKit人抗巨细胞病毒抗体IgG 血液α-活性CNPG3比色法定量试剂盒50次 PorcineHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit猪热休克蛋白20(HSP-20)试剂盒 细胞冻存步骤:
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取
|
