细胞传代步骤：

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞简介：

兔冠状动脉成纤维分离自冠状动脉组织；冠状动脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部，分左右两支，行于心脏表面。采用Schlesinger等的分类原则，将冠状动脉的分布分为三型：右优势型、均衡型、左优势型。左右冠状动脉是升主动脉的第一对分支。左冠状动脉为一短干，发自左主动脉窦，经肺动脉起始部和左心耳之间，沿冠状沟向左前方行后，立即分为前室间支和旋支。前室间支沿前室间沟下行，旋支绕过心尖切迹至心的膈面与右冠状动脉的后室间支相吻合。它是构成冠状动脉壁的主要细胞成分，细胞膜上分布着多种离子通道，如电压依赖性Na+通道、多种Ca2+通道和K+通道；它们参与了静息电位的维持与细胞膜电位的复极化、超极化，调节血管平滑肌的收缩及舒张功能，此外动脉粥样硬化的发展也涉及冠状动脉平滑肌细胞增殖、炎症及凋亡等。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

实验室分离的兔冠状动脉成纤维采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：

实验室分离的兔冠状动脉成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传2-3代左右；2代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔冠状动脉成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞复苏步骤:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

公司正在出售的产品：

人异质型核糖核蛋白复合物/抗RA33抗体(hNP/RA33)ELISA 试剂盒

Human ansfer factor (TF) ELISA Kit 人转移因子(TF)试剂盒

Humahymidylatesyhetase,TSELISAKit 人胸苷酸合成酶(TS)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanIerleukin17,IL-17试剂盒人白介素17(IL-17)试剂盒规格：96T/48T

组织可溶性总蛋白制备试剂盒20次

Humaniestinalfattyacidbindingprotein，iFABPELISAKit人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)试剂盒规格：96T/48T

人载脂蛋白E试剂盒   人载脂蛋白E试剂盒   规格型号：96T/48T   人载脂蛋白E试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：人载脂蛋白E试剂盒、人载脂蛋白E 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人载脂蛋白C3试剂盒   人载脂蛋白C3试剂盒   规格型号：96T/48T   人载脂蛋白C3试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：人载脂蛋白C3试剂盒、人载脂蛋白C3 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人载脂蛋白B100试剂盒   人载脂蛋白B100试剂盒   规格型号：96T/48T   人载脂蛋白B100试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：人载脂蛋白B100试剂盒、人载脂蛋白B100 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人载脂蛋白A5试剂盒   人载脂蛋白A5试剂盒   规格型号：96T/48T   人载脂蛋白A5试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：人载脂蛋白A5试剂盒、人载脂蛋白A5 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

泛肌动蛋白重组兔单抗

豚鼠白介素18(IL-18)试剂盒 ，英文名： IL-18 ELISA Kit

Human ubiquitin ligase (E3/UBPL) ELISA Kit 人泛素连接酶(E3/UBPL)试剂盒

rabbitIerleukin8,IL-8ELISAKit 兔子白介素8(IL-8/CXCL8)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-CGELISAKit大鼠绒毛膜β

细菌乙醇脱氢酶总活性比色法定量试剂盒20次

RabbitFibrinogen,FbgELISAKit兔血纤蛋白原(Fbg)试剂盒规格：96T/48T

溶质载体家族22成员10抗体

ACVR2A重组小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

Beta-Amyloid(1-28 0.5mgBeta-Amyloid(1-28) β淀粉样肽1-28(多肽蛋白)

NRG1重组人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 标签) Protein

ITGAX & ITGB2 Protein Human 重组人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白

FZD4 Protein Rat 重组大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 标签)

兔冠状动脉成纤维细胞Beta-Amyloid(1-28 0.5mgBeta-Amyloid(1-28) β淀粉样肽1-28(多肽蛋白)

ITGAX & ITGB2 Protein Human 重组人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白

ACVR2A重组小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

FZD4 Protein Rat 重组大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 标签)

NRG1重组人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 标签) Protein

细胞冻存步骤:

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取