细胞传代步骤：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞简介：
兔关节软骨分离自关节软骨组织；关节软骨属于透明软骨，表面光滑、呈淡蓝色、有光泽，它是由一种特殊的叫做致密结缔组织的胶原纤维构成的基本框架，这种框架呈半环形，类似拱形球门，其底端紧紧附着在下面的骨质上，上端朝向关节面，这种结构使关节软骨紧紧与骨结合起来而不会掉下来，同时当受到压力时候，还可以有少许的变形，起到缓冲压力的作用。在这些纤维之间，散在分布着软骨细胞，软骨细胞由浅层向深层逐渐由扁平样至椭圆或圆形的细胞组成，这些软骨细胞维持关节软骨的正常代谢。关节软骨没有神经支配，也没有血管，其营养成分必须从关节液中取得，而其代谢废物也必须排至关节液中，关节软骨的这种营养代谢必须通过关节运动，使关节软骨不断的受到压力刺激才行，所以关节运动对于维持关节软骨的正常结构起重要的作用。关节软骨细胞位于关节软骨陷窝内。幼稚的关节软骨细胞位于关节软骨组织的表层，单个分布、体积较小、呈椭圆形，长轴与关节软骨表面平行，越向深层的关节软骨细胞体积之间增大呈圆形，细胞核圆形或卵圆形、染色浅，细胞质弱嗜碱性，常见数量不一的脂滴。成熟的关节软骨细胞多2-8个成群分布于关节软骨陷窝内，这些关节软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成，称为同源细胞群。电镜下，关节软骨细胞有突起和皱褶，细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体。在组织切片中，关节软骨细胞收缩为不规则形，在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙。体外培养的关节软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。 方法简介：
公司实验室分离的兔关节软骨采用胶原酶联合消化制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 质量检测：
公司实验室分离的兔关节软骨经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 产品名称 | 兔关节软骨细胞 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 组织来源 | 关节软骨组织 | 产品货号 | YS-01X7003 | 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 梭形、多角形 |
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每3-4天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 梭形、多角形 传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳 消化液 0.25% 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 
细胞复苏步骤:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 公司正在出售的产品：
大鼠白介素32(IL-32)试剂盒 ，英文名： IL-32 ELISA Kit Mouse soluble ierleukin 2 receptor alpha chain (IL-2sR alpha /CD25) ELISA Kit 小鼠白介素2可溶性受体α链(IL-2sRα/CD25)试剂盒 ELISA 小鼠可溶性细胞间粘附分子-1 (mouse sICAM-1) 进口分装 CLIAKitforInhbb(Humaninhibinbeta-B)ELISAKit人抑制素β-B 通用型柑桔枯萎病苟养木杆菌(Xylellafastidiosa;Xf)试剂盒20次 ELISAKitFFA大鼠游离脂肪酸 小鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISAKit ELISA. 96T/48T 小鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISAKit ELISA. 96T/48T 小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)ELISAKit ELISA. 96T/48T 小鼠红细胞生成素(EPO)ELISAKit ELISA. 96T/48T AF750标记的微管蛋白抗体 小鼠胚胎干细胞系MESPU30(M30)ELISA 试剂盒 96T/48T Human coagulation factor II (F II) ELISA Kit 人Ⅱ(FⅡ)试剂盒 Humansolublefibrinmonomercomplex,SFMCELISAKit 人可溶性血纤蛋白单体复合物(SFMC)试剂盒 96T/48T 进口分装 Human1,5-anhydroglucitol,1,5-AG试剂盒人1,5-脱水葡萄糖醇/1,5-脱水山梨(1,5-AG)试剂盒规格：96T/48T 真菌/酵母细胞线粒体分离(高)试剂盒10次 MouseAquaporin5,AQP-5ELISAKit小鼠水通道蛋白5(AQP-5)试剂盒规格：96T/48T 硫酸乙酰肝素6脑苷脂转硫酸酶1抗体 BMPR2重组人 BMPR2 / BMPR-II 蛋白 (His & Fc 标签) Protein 巨噬细胞移动抑制因子(MIF)重组蛋白 Recombinant Macrophage Migration Inhibitory Factor (MIF) GFER重组人 GFER / ALR 蛋白 Protein CSF2RB Protein Human 重组人 CD131 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 蛋白 HA Protein H7N3 重组甲型流感 H7N3 (A/turkey/Italy/214845/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 兔关节软骨细胞巨噬细胞移动抑制因子(MIF)重组蛋白 Recombinant Macrophage Migration Inhibitory Factor (MIF) CSF2RB Protein Human 重组人 CD131 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 蛋白 BMPR2重组人 BMPR2 / BMPR-II 蛋白 (His & Fc 标签) Protein HA Protein H7N3 重组甲型流感 H7N3 (A/turkey/Italy/214845/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 GFER重组人 GFER / ALR 蛋白 Protein 细胞冻存步骤:
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
|
