细胞传代步骤：

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞简介：

兔肝外胆管上皮分离自肝外胆管组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方。肝脏是机体消化系统中大的消化腺，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面，大部分肝为肋弓所复盖，仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接。临床上常见的胆管病变如胆道闭锁、先天性胆总管囊肿、原发性硬化性胆管炎等，都是以胆管上皮细胞为病变的靶位，引起胆管上皮的损伤。了解正常胆管上皮细胞的生物学特征和病变胆管上皮细胞的病理生理学特征对研究胆管病变的发病机制、诊断和治疗具有重要意义。

方法简介：

实验室分离的兔肝外胆管上皮采用胶原酶灌注消化法后，再用胶原酶-DNA酶联合消化，接种至预先包被鼠尾胶原的培养瓶中，通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：

实验室分离的兔肝外胆管上皮经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性：可传1-2代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔肝外胆管上皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞复苏步骤:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

公司正在出售的产品：

大鼠细胞间粘附分子2(ICAM2)试剂盒 ，英文名： ICAM2 ELISA Kit

Mouse somatostatin (SS) ELISA Kit 小鼠(SS)试剂盒

MouseCyclicguanosinemonophosphate,cGMPELISAKit 小鼠环0酸鸟苷(cGMP)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHSP-40(HumanHeatShockProtein40)ELISAKit人热休克蛋白40

细胞MAPKAPKINASE3激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-17大鼠白介素17

小鼠0酸肌醇3激酶试剂盒   小鼠0酸肌醇3激酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠0酸肌醇3激酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠0酸肌醇3激酶试剂盒、小鼠0酸肌醇3激酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠0酸化细胞外信号调节激酶试剂盒   小鼠0酸化细胞外信号调节激酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠0酸化细胞外信号调节激酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠0酸化细胞外信号调节激酶试剂盒、小鼠0酸化细胞外信号调节激酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

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纤维母细胞生长因子4抗体

小鼠前列腺素F(PGF)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human thrombin aithrombin complex (TAT) ELISA Kit 人抗复合物(TAT)试剂盒

HumanArginase,ArgELISAKit 人精酶(Arg)试剂盒 96T/48T 进口分装

GuineapigTumornecrosisfactorα,TNF-α试剂盒豚鼠坏死因子α(TNF-α)试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞染色质免疫沉淀分析(CHIP)试剂盒10次

MouseBonemorphogeneticprotein4,BMP-4ELISAKit小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)试剂盒规格：96T/48T

GLIS1蛋白抗体

IL4R重组大鼠 IL4R / Il4ra 蛋白 (Fc 标签) Protein

DNA-PKcs peptide DNA依赖蛋白激酶催化亚基多肽抗原 0.5mgDNA-PKcs peptide DNA依赖蛋白激酶催化亚基多肽抗原

USP5重组人 USP5 / ISOT 蛋白 Protein

CSAG1 Protein Human 重组人 CSAGE / CSAG1 蛋白 (Fc 标签)

TNFRSF10B Protein Mouse 重组小鼠 TRAIL R2 / CD262 / TNFRSF10B 蛋白

兔肝外胆管上皮细胞DNA-PKcs peptide DNA依赖蛋白激酶催化亚基多肽抗原 0.5mgDNA-PKcs peptide DNA依赖蛋白激酶催化亚基多肽抗原

CSAG1 Protein Human 重组人 CSAGE / CSAG1 蛋白 (Fc 标签)

IL4R重组大鼠 IL4R / Il4ra 蛋白 (Fc 标签) Protein

TNFRSF10B Protein Mouse 重组小鼠 TRAIL R2 / CD262 / TNFRSF10B 蛋白

USP5重组人 USP5 / ISOT 蛋白 Protein

细胞冻存步骤:

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。